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摘要 [目的]建立高效液相色谱法多波长同时测定不同产地杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷3种活性成分含量。[方法]采用Thermal Hypersil BDS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，乙腈-0.3%磷酸溶液梯度洗脱；流速1.0 mL/min；柱温26 ℃；多波长检测206、238、327 nm。[结果]桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷均在测定范围内呈良好的线性关系（r≥0.999 1）。同一时期内采集，不同产地的杜仲雄花茶因环境的影响，桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷的含量差异较大。[结论]所建方法简便快捷、重现性好，可用于杜仲雄花茶桃叶珊瑚苷、绿原酸及京尼平苷的测定。
关键词 杜仲雄花茶；桃叶珊瑚苷；绿原酸；京尼平苷；高效液相色谱法
中图分类号 R284.1 文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2019）08-0192-03
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.08.050
Abstract [Objective] The research aimed to establish a HPLC method for simultaneous determination of aucubin，chlorogenic acid and geniposide in Eucommia ulmoides male flower tea from different habitats at multiple wavelengths.[Method]Thermal Hypersil BDS C18 （ 4.6 mm×250 mm，5 μm）column was used for gradient elution with acetonitrile-0.3% phosphoric acid solution.The flow rate was 1.0 mL/min；column temperature was 26 ℃；multiwavelength detection：206 nm，238 nm，327 nm.[Result]Aucubin， chlorogenic acid and geniposide showed good linear relationships （r≥0.999 1） in the determination range.The contents of aucubin， chlorogenic acid and geniposide in Eucommia ulmoides male flower tea collected in the same period vary greatly due to environmental influences. [Conclusion]The established method is simple， rapid and reproducible， and can be used for the determination of aucubin， chlorogenic acid and geniposide in Eucommia ulmoides male flower tea.
Key words Eucommia ulmoides male flower tea；Aucubin；Chlorogenic acid；Geniposide；HPLC
杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）屬于杜仲科（Eucommiaceae）杜仲属（Eucommia）乔木植物。近几十年，国内外学者的大量研究表明，杜仲富含次生代谢产物，主要有总黄酮、木质素类、苯丙素类、环烯醚萜类、三萜、甾类等[1-4]。目前，在杜仲全身中分离出的环稀醚萜类化合物有近20多种，包括京尼平苷、京尼平、京尼平苦酸、桃叶珊瑚苷、车叶草苷等[5]。环烯醚萜类化合物具有抗炎、抗肿瘤、利胆、保肝、通便及治疗风湿等功能，绿原酸具有抗菌、抑制突变、保护心血管等作用；苯丙素类化合物，包括香豆素、绿原酸、绿原酸甲酷、咖啡酸乙酷、松柏苷、松柏酸、丁香苷、间轻基苯丙酸和寇布拉苦等[6-11]。
目前，市场出售的杜仲雄花茶远远达不到杜仲雄花本身具有的价值。产地差异是造成杜仲雄花茶品质差异的原因之一。杜仲雄花经过杀青、烘干、复火工序等加工成杜仲雄花茶，在此过程中，杜仲雄花中富含的环烯醚萜等活性成分易发生水解等破坏，同样造成杜仲雄花茶外观品质变差，营养成分流失。笔者建立高效液相色谱法同时测定3种活性成分，完善了杜仲雄花的检测方法，节省了大量时间与工序；同时对比了不同产地的杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷成分含量，为杜仲雄花的加工方式和消费者提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 试验仪器 Thermo Evolution 220型紫外可见分光光度计（Thermo Fisher Scientific-Shanghai）；Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；XD-5200DT型超声波清洗仪（南京先欧仪器制造有限公司）；Hei-VAP value旋转蒸发仪；AL204型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；AEL-40SM型半微量天平（Shimadzu 1991）。水浴锅（HWS-24）；烘箱（WGLL-230BE，天津市泰斯特仪器有限公司）；粉碎机。
1.2 试验材料 桃叶珊瑚苷、京尼平苷、绿原酸对照品来自中国生物制品鉴定院；乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸溶液、超纯水、分析乙醇等均购为分析纯。原料编号和产地见表1。
1.3 试验方法
1.3.1 色谱条件。Thermal Hypersil BDS C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.3%磷酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按表2中的规定梯度洗脱，体积流量1.0 mL/min；柱温26 ℃；多波长检测：206、238、327 nm；检测时间为25 min，进样量为20 μL。 1.3.2 对照品溶液的制备。分别精密称取桃叶珊瑚苷对照品京尼平苷8.02 mg、绿原酸对照品7.88 mg、京尼平苷对照品4.33 mg，置同一5 mL棕色容量瓶中，超纯水定容，摇匀，即得。
1.3.3 供试品溶液的制备。取杜仲雄花茶样品，研细，过四号筛，取约0.8 g，精密称定，置25 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液30 mL，密塞，超声处理40 min，过滤得滤液，向装有滤渣的锥形瓶中再次加入甲醇溶液30 mL，同样处理方法得滤液并合并2次滤液浓缩，以超纯水定容至25 mL容量瓶中，摇匀，再经0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液即为供试品溶液。
1.3.4 系统适应性试验。分别吸取对照品溶液及供试品溶液各15 μL，在“1.3.1”色谱条件下，注入液相色谱仪进行测定，记录色谱图，考察系统适应性。
1.3.5 线性关系考察。分别精密吸取混合对照品溶液0.02、0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL定容至10 mL容量瓶中，再经0.45 μm微孔膜滤过，依次进样20 μL测定其峰面积。分别以对照品浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。
1.3.6 精密度试验。准确吸取含桃叶珊瑚苷8.02 μg/mL、绿原酸7.80 μg/mL、京尼平苷4.33 μg/mL的混合对照品溶液20 μL，重复进样5次，测定并计算RSD。
1.3.7 稳定性试验。取编号③产地的杜仲雄花茶，称取杜仲雄花茶粗粉各6份，每份约0.8 g，按“1.3.3”方法制备供试品溶液，分别于制备后的0、2、4、6、8 h进样测定，并计算RSD。
1.3.8 重复性试验。取编号③产地杜仲雄花茶粉碎成粗粉，分别取粗粉0.4 g，各5份，按“1.3.3”方法制备供试品溶液，进样测定，计算RSD。
1.3.9 回收率试验。取编号③产地杜仲雄花茶粗粉约0.4 g置于25 mL锥形瓶，各6份，每份分别加入含桃叶珊瑚苷8.02 μg/mL、绿原酸7.88 μg/mL、京尼平苷4.33 μg/mL的混合對照品溶液适量，按“1.3.3”方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率和RSD。
1.3.10 样品测定。依照“1.3.3”供试品制备方法及“1.3.1”色谱条件测定各个产地的桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷3种活性成分含量。
2 结果与分析
2.1 方法学考察
2.1.1 系统适应性试验。从图1可以看出，在相同的色谱条件下，样品在不同对照品相同的出峰时间（t1=6.7 min，t2=18.9min，t3=21.5min）都有一个峰出现，说明该峰即为样品中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷的峰，且该条件下样品中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷的峰与相邻峰有一定的分离度，说明此条件适合该样品测定桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷。
2.1.2 线性关系考察。分别以对照品浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。回归方程与线性范围如表3所示，结果表明，桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷对照品浓度与色谱峰面积线性关系良好。
2.1.3 精密度试验。按照“1.3.6”操作，重复进样5次，测定京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷峰面积的RSD分别为1.58%、0.82%、1.35%，表明精密度良好。
2.1.4 稳定性试验。按照“1.3.7”操作，计算得出产地③杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷峰面积的RSD分别为1.33%、0.78%、1.24%，表明编号③产地杜仲雄花茶溶液中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷在8 h内稳定。
2.1.5 重复性试验。按照“1.3.8”操作，取编号③产地杜仲雄花茶粉测定，计算雄花花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷峰面积的RSD分别为1.39%、1.60%、1.78%，表明重复性好。
2.1.6 回收率试验。按照“1.3.9”操作，计算得出编号③产地的杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷的平均回收率分别为95.3%、98.1%、96.8%，RSD分别为1.64%、1.51%、1.74%，表明该方法重复性好，方法可靠。
2.2 样品测定 由表4可知，不同产地杜仲雄花茶的桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷含量差异较大，其中编号⑦即湖北（襄阳）的杜仲雄花茶中京尼平苷含量较高，编号⑧即陕西（略阳）的雄花茶中桃叶珊瑚苷和绿原酸含量较高；就湖南产地而言，张家界慈利县2016年的杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷含量整体高于其他地区；造成不同活性成分含量的差异不仅与当地的气候条件、土壤情况以及海拔有关，还与贮存方式有关。
3 讨论
3.1 色谱条件的选择 根据桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷3种物质的结构，选择C18柱，以乙腈-磷酸水作为流动相进行分离，色谱峰分离效果较好。
3.2 柱温选择 色谱柱与流动相的温度影响着组分的分离平衡。柱温26 ℃时，组分峰的分离度相对较好，升高温度，各色谱峰之间已无明显差异，因此，选择柱温为26 ℃。
3.3 检测波长的选择 已有文献同时测定3种活性成分采用单波长或者双波长检测[12-13]，其中绿原酸未在其最大吸收峰处定量检测，而该试验测量的桃叶珊瑚苷含量相对较低，若采用双波长也未必能被检测。所以该试验选择二极管阵列检测器DAD，使所有波长的光在接收器上同时被检测。桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷分别在206、327、238 nm处出现最大吸收峰，因此在液相参数选择中应用多波长进行测定。
3.4 流动相的选择 杜仲雄花茶成分复杂，目标峰附近的杂质峰较多，尤其桃叶珊瑚苷出峰时间短，易与溶剂峰交叠重合，该试验一方面采用甲醇提取，超纯水定容，在提高提取率的同时，减少了在测定过程中溶剂峰的影响；另一方面，调小流动相的极性，最终选择在0～8 min，乙腈∶0.3%磷酸水=4∶96，绿原酸与京尼平苷出峰时间20 min左右，选择乙腈∶0.3%磷酸水=11∶89。在流动相中加入少量磷酸可抑制羧基、酚羟基的离解，从而使两峰的峰形得到改善。因此，最终选择乙腈-0.3%磷酸水溶液进行梯度洗脱可使3种成分有较好的分离度。 4 结论
该研究建立了HPLC法多波长同时测定不同产地杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷3种活性成分含量。采用Thermal Hypersil BDS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，乙腈-0.3%磷酸溶液梯度洗脱；流速1.0 mL/min；柱温26 ℃；多波长检测：206、238、327 nm。其中湖北（襄阳）的杜仲雄花茶中京尼平苷含量相对较高，陕西（略阳）的雄花茶中桃叶珊瑚苷和绿原酸含量相对较高。
经方法学考察，该试验的方法具有良好的精密度、稳定性和重复性，可对不同产地杜仲雄花茶含量进行分析比较，对比了各产地之间的含量差异，为测定杜仲雄花茶的活性成分提供了快捷、可行的测定方法，也为其质量控制提供依据。
参考文献
[1]张康健，王蓝，马柏林，等.中国杜仲次生代谢物[M].北京：科学出版社，2002.
[2] 张康健，赵德义，董娟娥.风靡全球的杜仲健康新理念[M].杨陵：西北农林科技大学出版社，2005.
[3] 董娟娥，马希汉.反相高效液相色谱法同时分离测定杜仲雄花及其产品中的京尼平苷酸和绿原酸[J].色谱，2007，25（2）：217-220.
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[11] 杜庆鑫， 魏艳秀， 刘攀峰，等. 杜仲雄花主要活性成分含量的多样性[J]. 林业科学，2017，53（2）：35-43.
[12] 黄勤挽， 王瑾， 苏娟，等. 双波长HPLC法同时测定杜仲雄花中3种成分的含量[J]. 中国药房， 2011，22（27）：2565-2567.
[13] 李钦， 杜红岩， 杜兰英，等. HPLC法测定杜仲雄花和杜仲雄花茶中京尼平苷酸、绿原酸和京尼平苷[J]. 中草药，2009，40（1）：71-72，143.
关键词 杜仲雄花茶；桃叶珊瑚苷；绿原酸；京尼平苷；高效液相色谱法
中图分类号 R284.1 文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2019）08-0192-03
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.08.050
Abstract [Objective] The research aimed to establish a HPLC method for simultaneous determination of aucubin，chlorogenic acid and geniposide in Eucommia ulmoides male flower tea from different habitats at multiple wavelengths.[Method]Thermal Hypersil BDS C18 （ 4.6 mm×250 mm，5 μm）column was used for gradient elution with acetonitrile-0.3% phosphoric acid solution.The flow rate was 1.0 mL/min；column temperature was 26 ℃；multiwavelength detection：206 nm，238 nm，327 nm.[Result]Aucubin， chlorogenic acid and geniposide showed good linear relationships （r≥0.999 1） in the determination range.The contents of aucubin， chlorogenic acid and geniposide in Eucommia ulmoides male flower tea collected in the same period vary greatly due to environmental influences. [Conclusion]The established method is simple， rapid and reproducible， and can be used for the determination of aucubin， chlorogenic acid and geniposide in Eucommia ulmoides male flower tea.
Key words Eucommia ulmoides male flower tea；Aucubin；Chlorogenic acid；Geniposide；HPLC
杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）屬于杜仲科（Eucommiaceae）杜仲属（Eucommia）乔木植物。近几十年，国内外学者的大量研究表明，杜仲富含次生代谢产物，主要有总黄酮、木质素类、苯丙素类、环烯醚萜类、三萜、甾类等[1-4]。目前，在杜仲全身中分离出的环稀醚萜类化合物有近20多种，包括京尼平苷、京尼平、京尼平苦酸、桃叶珊瑚苷、车叶草苷等[5]。环烯醚萜类化合物具有抗炎、抗肿瘤、利胆、保肝、通便及治疗风湿等功能，绿原酸具有抗菌、抑制突变、保护心血管等作用；苯丙素类化合物，包括香豆素、绿原酸、绿原酸甲酷、咖啡酸乙酷、松柏苷、松柏酸、丁香苷、间轻基苯丙酸和寇布拉苦等[6-11]。
目前，市场出售的杜仲雄花茶远远达不到杜仲雄花本身具有的价值。产地差异是造成杜仲雄花茶品质差异的原因之一。杜仲雄花经过杀青、烘干、复火工序等加工成杜仲雄花茶，在此过程中，杜仲雄花中富含的环烯醚萜等活性成分易发生水解等破坏，同样造成杜仲雄花茶外观品质变差，营养成分流失。笔者建立高效液相色谱法同时测定3种活性成分，完善了杜仲雄花的检测方法，节省了大量时间与工序；同时对比了不同产地的杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷成分含量，为杜仲雄花的加工方式和消费者提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 试验仪器 Thermo Evolution 220型紫外可见分光光度计（Thermo Fisher Scientific-Shanghai）；Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；XD-5200DT型超声波清洗仪（南京先欧仪器制造有限公司）；Hei-VAP value旋转蒸发仪；AL204型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；AEL-40SM型半微量天平（Shimadzu 1991）。水浴锅（HWS-24）；烘箱（WGLL-230BE，天津市泰斯特仪器有限公司）；粉碎机。
1.2 试验材料 桃叶珊瑚苷、京尼平苷、绿原酸对照品来自中国生物制品鉴定院；乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸溶液、超纯水、分析乙醇等均购为分析纯。原料编号和产地见表1。
1.3 试验方法
1.3.1 色谱条件。Thermal Hypersil BDS C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.3%磷酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按表2中的规定梯度洗脱，体积流量1.0 mL/min；柱温26 ℃；多波长检测：206、238、327 nm；检测时间为25 min，进样量为20 μL。 1.3.2 对照品溶液的制备。分别精密称取桃叶珊瑚苷对照品京尼平苷8.02 mg、绿原酸对照品7.88 mg、京尼平苷对照品4.33 mg，置同一5 mL棕色容量瓶中，超纯水定容，摇匀，即得。
1.3.3 供试品溶液的制备。取杜仲雄花茶样品，研细，过四号筛，取约0.8 g，精密称定，置25 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液30 mL，密塞，超声处理40 min，过滤得滤液，向装有滤渣的锥形瓶中再次加入甲醇溶液30 mL，同样处理方法得滤液并合并2次滤液浓缩，以超纯水定容至25 mL容量瓶中，摇匀，再经0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液即为供试品溶液。
1.3.4 系统适应性试验。分别吸取对照品溶液及供试品溶液各15 μL，在“1.3.1”色谱条件下，注入液相色谱仪进行测定，记录色谱图，考察系统适应性。
1.3.5 线性关系考察。分别精密吸取混合对照品溶液0.02、0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL定容至10 mL容量瓶中，再经0.45 μm微孔膜滤过，依次进样20 μL测定其峰面积。分别以对照品浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。
1.3.6 精密度试验。准确吸取含桃叶珊瑚苷8.02 μg/mL、绿原酸7.80 μg/mL、京尼平苷4.33 μg/mL的混合对照品溶液20 μL，重复进样5次，测定并计算RSD。
1.3.7 稳定性试验。取编号③产地的杜仲雄花茶，称取杜仲雄花茶粗粉各6份，每份约0.8 g，按“1.3.3”方法制备供试品溶液，分别于制备后的0、2、4、6、8 h进样测定，并计算RSD。
1.3.8 重复性试验。取编号③产地杜仲雄花茶粉碎成粗粉，分别取粗粉0.4 g，各5份，按“1.3.3”方法制备供试品溶液，进样测定，计算RSD。
1.3.9 回收率试验。取编号③产地杜仲雄花茶粗粉约0.4 g置于25 mL锥形瓶，各6份，每份分别加入含桃叶珊瑚苷8.02 μg/mL、绿原酸7.88 μg/mL、京尼平苷4.33 μg/mL的混合對照品溶液适量，按“1.3.3”方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率和RSD。
1.3.10 样品测定。依照“1.3.3”供试品制备方法及“1.3.1”色谱条件测定各个产地的桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷3种活性成分含量。
2 结果与分析
2.1 方法学考察
2.1.1 系统适应性试验。从图1可以看出，在相同的色谱条件下，样品在不同对照品相同的出峰时间（t1=6.7 min，t2=18.9min，t3=21.5min）都有一个峰出现，说明该峰即为样品中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷的峰，且该条件下样品中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷的峰与相邻峰有一定的分离度，说明此条件适合该样品测定桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷。
2.1.2 线性关系考察。分别以对照品浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。回归方程与线性范围如表3所示，结果表明，桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷对照品浓度与色谱峰面积线性关系良好。
2.1.3 精密度试验。按照“1.3.6”操作，重复进样5次，测定京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷峰面积的RSD分别为1.58%、0.82%、1.35%，表明精密度良好。
2.1.4 稳定性试验。按照“1.3.7”操作，计算得出产地③杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷峰面积的RSD分别为1.33%、0.78%、1.24%，表明编号③产地杜仲雄花茶溶液中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷在8 h内稳定。
2.1.5 重复性试验。按照“1.3.8”操作，取编号③产地杜仲雄花茶粉测定，计算雄花花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷峰面积的RSD分别为1.39%、1.60%、1.78%，表明重复性好。
2.1.6 回收率试验。按照“1.3.9”操作，计算得出编号③产地的杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷的平均回收率分别为95.3%、98.1%、96.8%，RSD分别为1.64%、1.51%、1.74%，表明该方法重复性好，方法可靠。
2.2 样品测定 由表4可知，不同产地杜仲雄花茶的桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷含量差异较大，其中编号⑦即湖北（襄阳）的杜仲雄花茶中京尼平苷含量较高，编号⑧即陕西（略阳）的雄花茶中桃叶珊瑚苷和绿原酸含量较高；就湖南产地而言，张家界慈利县2016年的杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷含量整体高于其他地区；造成不同活性成分含量的差异不仅与当地的气候条件、土壤情况以及海拔有关，还与贮存方式有关。
3 讨论
3.1 色谱条件的选择 根据桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷3种物质的结构，选择C18柱，以乙腈-磷酸水作为流动相进行分离，色谱峰分离效果较好。
3.2 柱温选择 色谱柱与流动相的温度影响着组分的分离平衡。柱温26 ℃时，组分峰的分离度相对较好，升高温度，各色谱峰之间已无明显差异，因此，选择柱温为26 ℃。
3.3 检测波长的选择 已有文献同时测定3种活性成分采用单波长或者双波长检测[12-13]，其中绿原酸未在其最大吸收峰处定量检测，而该试验测量的桃叶珊瑚苷含量相对较低，若采用双波长也未必能被检测。所以该试验选择二极管阵列检测器DAD，使所有波长的光在接收器上同时被检测。桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷分别在206、327、238 nm处出现最大吸收峰，因此在液相参数选择中应用多波长进行测定。
3.4 流动相的选择 杜仲雄花茶成分复杂，目标峰附近的杂质峰较多，尤其桃叶珊瑚苷出峰时间短，易与溶剂峰交叠重合，该试验一方面采用甲醇提取，超纯水定容，在提高提取率的同时，减少了在测定过程中溶剂峰的影响；另一方面，调小流动相的极性，最终选择在0～8 min，乙腈∶0.3%磷酸水=4∶96，绿原酸与京尼平苷出峰时间20 min左右，选择乙腈∶0.3%磷酸水=11∶89。在流动相中加入少量磷酸可抑制羧基、酚羟基的离解，从而使两峰的峰形得到改善。因此，最终选择乙腈-0.3%磷酸水溶液进行梯度洗脱可使3种成分有较好的分离度。 4 结论
该研究建立了HPLC法多波长同时测定不同产地杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷、绿原酸和京尼平苷3种活性成分含量。采用Thermal Hypersil BDS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，乙腈-0.3%磷酸溶液梯度洗脱；流速1.0 mL/min；柱温26 ℃；多波长检测：206、238、327 nm。其中湖北（襄阳）的杜仲雄花茶中京尼平苷含量相对较高，陕西（略阳）的雄花茶中桃叶珊瑚苷和绿原酸含量相对较高。
经方法学考察，该试验的方法具有良好的精密度、稳定性和重复性，可对不同产地杜仲雄花茶含量进行分析比较，对比了各产地之间的含量差异，为测定杜仲雄花茶的活性成分提供了快捷、可行的测定方法，也为其质量控制提供依据。
参考文献
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