【摘 要】
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目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性.方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒.将基因缺失盒经PEG介导转化到野生型原生质体中,在含有潮霉素B的TCC培养基上筛选转化子,通过PCR正负筛查获得Folprp4基因缺失突变株(AFolprp4).构建含有Folprp4基因的载体pZDH1,并将其转化到敲除突变体中进行互补测验.结果:与野生型(hm)和异位插入突
【机 构】
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内蒙古师范大学生命科学与技术学院 内蒙古自治区高等学校生物多样性保护与可持续利用重点实验室 呼和浩特 010022
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目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性.方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒.将基因缺失盒经PEG介导转化到野生型原生质体中,在含有潮霉素B的TCC培养基上筛选转化子,通过PCR正负筛查获得Folprp4基因缺失突变株(AFolprp4).构建含有Folprp4基因的载体pZDH1,并将其转化到敲除突变体中进行互补测验.结果:与野生型(hm)和异位插入突变体(ecFolprp4)相比,敲除突变体菌丝生长受到严重阻碍,当野生型和异位插入突变体长满整个平板时,敲除突变体菌落呈小点状.敲除突变体的另一个显著变化是△Folprp4的分生孢子产量显著下降.侵染实验表明,△Folprp4对亚麻幼苗的毒力显著降低.互补实验表明,该互补载体的回复子(Folprp4-C)在菌落形态、生长速率、分生孢子产量和毒力方面均恢复到了野生型菌株.结论:Folprp4基因与尖孢镰刀菌的菌丝生长、分生孢子发生和致病性有关.
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