【摘 要】
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目的 通过模拟肿瘤微环境,观察自噬抑制后自噬相关蛋白5(ATG5)对甲状腺乳头状癌细胞增殖的影响.方法 蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)实验检测甲状腺正常细胞系(Nthy-ori-3-1)和甲状腺乳头状癌K1细胞中ATG5蛋白和mRNA表达差异;培养敲除ATG5的shRNA-486和shRNA-938稳转细胞株,细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验和克隆形成实验分别检测在体积分数为10％血清培养条件下和体积分数为0.5％血清培养条件下,shR-NA-486和shRNA-938与对照组对K1
【机 构】
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济宁医学院法医学与医学检验学院,山东 济宁 272067
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目的 通过模拟肿瘤微环境,观察自噬抑制后自噬相关蛋白5(ATG5)对甲状腺乳头状癌细胞增殖的影响.方法 蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)实验检测甲状腺正常细胞系(Nthy-ori-3-1)和甲状腺乳头状癌K1细胞中ATG5蛋白和mRNA表达差异;培养敲除ATG5的shRNA-486和shRNA-938稳转细胞株,细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验和克隆形成实验分别检测在体积分数为10％血清培养条件下和体积分数为0.5％血清培养条件下,shR-NA-486和shRNA-938与对照组对K1细胞增殖的影响.结果 Nthy-ori-3-1细胞中ATG5蛋白表达量为0.682±0.037,低于K1细胞的1.933±0.010,t=32.330,P<0.001.Nthy-ori-3-1细胞中ATG5 mRNA表达量为0.503±0.017,低于K1细胞的0.902±0.016,t=17.140,P<0.001.转染ATG5-shRNA后,对照组LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值(5.521±0.205)低于shRNA-486敲除组(14.490±0.512)和shRNA-938敲除组(9.639±0.558);对照组p62表达量(1.335±0.0754)低于shRNA-486敲除组(2.593±0.081)和shRNA-938敲除组(2.830±0.066).CCK-8增殖实验中,在10％血清培养条件下,对照组分别与shRNA-486敲除组和shRNA-938敲除组比较,敲除ATG5后促进了K1细胞的增殖,经两因素方差分析,F敲除=38.590,P敲除<0.001,F时间=385.300,P时间<0.001;在0.5％血清培养条件下,对照组分别与shRNA-486敲除组和shRNA-938敲除组比较,敲除ATG5后抑制了K1细胞的增殖,经两因素方差分析,F敲除=14.730,P敲除=0.005,F时间=336.300,P时间<0.001.克隆形成实验10 d后观察发现,在10％血清培养条件下,对照组分别与shRNA-486敲除组和shRNA-938敲除组比较,敲除ATG5后促进了K1细胞的增殖;在0.5％血清培养条件下,对照组与shRNA-486敲除组和shRNA-938敲除组比较,敲除ATG5后反而抑制了K1细胞的增殖,经两因素方差分析,F敲除=76.380,P敲除=0.001,F血清浓度=1106,P血清浓度=0.001.结论 自噬对甲状腺癌K1细胞增殖的调控受癌细胞所处微环境的影响,在营养充足时,阻断自噬抑制了甲状腺癌细胞的增殖;在营养剥夺时,阻断自噬促进甲状腺癌细胞的增殖.
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