人血管内皮生长因子的克隆表达及活性鉴定

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【目的】克隆人血管内皮生长因子165基因,并测定蛋白质的表达及鉴定其活性。【方法】用PCR法从人心脏cDNA文库中钓取目的基因VEGF165,插入质粒PUC19中并测序鉴定。构建真核表达重组质粒AdtrackCMV-VEGF165转染293细胞,用RNA斑点杂交和Western blot方法检测VEGF165基因表达,并通过Miles试验检测VEGF165蛋白活性。【结果】 PCR产物为582 bp,测序结果表明其序列正确,在RNA和蛋白水平检测到VEGF165基因表达,VEGF165蛋白相对分子质量为2
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