人源抗体组合文库的构建及抗甲状旁腺素相关蛋白单克隆抗体的筛选

来源 :科学通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:smailfish2006
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用PCR技术从人外周血淋巴细胞中扩增出Fd段和κ链基因,构建了噬菌体抗体库,其库容量为1.5×10~8。将甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)合成肽固相化对该文库进行了“吸附-洗脱-扩增”的筛选,使特异性抗体富集了500多倍。经5轮筛选其噬菌体抗体阳性率为62%(31/50)。抑制实验表明。可溶性表达的Fab段具有结合PTHrP的特异性。SDS-PAGE分析显示其分子量约为50ku。 The Fd segment and kappa chain gene were amplified by PCR from human peripheral blood lymphocytes and the phage antibody library was constructed. The library capacity was 1.5 × 10 ~ 8. The library was “adsorbed-eluted-amplified” by immobilizing parathyroid hormone-related protein (PTHrP) synthetic peptide, enriching the specific antibody by more than 500-fold. After 5 rounds of screening, the phage antibody positive rate was 62% (31/50). Suppression experiments show. The solublely expressed Fab fragment has the specificity of binding to PTHrP. SDS-PAGE analysis showed that its molecular weight was about 50ku.
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