【摘 要】
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目的:构建DNAJA1(DnaJ heat shock protein family(Hsp40) member A1)基因过表达质粒,转染结肠癌细胞株,并对其是否转染成功进行鉴定.方法:Real-time聚合酶链反应(PCR)及West
【机 构】
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乐山市人民医院消化内科 四川 乐山 614000
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目的:构建DNAJA1(DnaJ heat shock protein family(Hsp40) member A1)基因过表达质粒,转染结肠癌细胞株,并对其是否转染成功进行鉴定.方法:Real-time聚合酶链反应(PCR)及Western blot检测6株结肠癌细胞及瞬时转染DNAJA1质粒的细胞中DNAJA1 mRNA水平.采用全基因合成法合成DNAJA1编码区序列并克隆入pEGFP-C1载体末端,构建重组质粒pEGFP-C-DNAJA1并进行测序及凝胶电泳鉴定.结果:6株结直肠癌细胞中,DNAJA1在HT29和HCT116中的mRNA和蛋白水平最较低,在LOVO和SW620细胞中较高.测序及凝胶电泳结果表明DNAJA1重组质粒构建成功.瞬时转染HT29和HCT116细胞后,与对照组相比,DNAJA1 mRNA分别升高约50倍,蛋白表达也明显升高.结论:成功构建DNAJA1基因过表达重组质粒,并有较高的转染水平,为进一步的研究提供了条件.
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