【摘 要】
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目的 评价重组PPE65蛋白IgG抗体用于检测肺结核患者的价值.方法 将编码结核分枝杆菌PPE65蛋白的基因克隆到PET-28a载体,并在大肠埃希菌中表达,镍亲和层析和离子层析法纯化重
【机 构】
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解放军第三○九医院中心实验室,沈阳市胸科医院检验科
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目的 评价重组PPE65蛋白IgG抗体用于检测肺结核患者的价值.方法 将编码结核分枝杆菌PPE65蛋白的基因克隆到PET-28a载体,并在大肠埃希菌中表达,镍亲和层析和离子层析法纯化重组PPE65蛋白,透析复性和Lowry法测蛋白浓度.采用ELISA法检测144例肺结核患者、144名健康者、56例非结核肺部疾病患者血清中抗重组PPE65蛋白和重组PstS1蛋白的IgG抗体水平.用ELISA检测144例肺结核患者和97名PPD皮试阴性健康人血清IgG结果绘制ROC曲线确定临界值.分析评价重组PPE65蛋白及其与重组PstS1蛋白联合检测肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性.结果 结核分枝杆菌PPE65蛋白在大肠埃希菌中获得表达,层析纯化获得纯度为95%的重组PPE65蛋白,复性后蛋白浓度为0.5 mg/ml.重组PPE65蛋白IgG抗体的ELISA检测临界值为0.64.重组PPE65蛋白诊断肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为34.7%(50/144)、93.5%(187/200)、79.4%(50/63)、66.5%(187/281)、68.9%(237/344);重组PPE65蛋白和重组PstS1蛋白联合诊断肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为59.0%(85/144)、91.0%(182/200)、82.5%(85/103)、75.5%(182/241)、77.6%(267/344).结论 结核分枝杆菌PPE65蛋白可作为结核患者血清检测的蛋白抗原之一.PPE65蛋白和重组PstS1蛋白IgG抗体联合检测用于结核病诊断可提高敏感度.
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