【摘 要】
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目的 探讨重组融合蛋白C-CPE-ETA′与CLDN-3和CLDN-4高表达卵巢癌细胞的特异性结合能力和细胞毒作用.方法 应用real-time RT-PCR方法检测3种卵巢癌细胞系CAOV3、OVCAR3、SKOV
【机 构】
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姚勤,青岛大学医学院附属医院手术室,Division of Molecular and Gene Therapies
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目的 探讨重组融合蛋白C-CPE-ETA′与CLDN-3和CLDN-4高表达卵巢癌细胞的特异性结合能力和细胞毒作用.方法 应用real-time RT-PCR方法检测3种卵巢癌细胞系CAOV3、OVCAR3、SKOV3和20例上皮性卵巢癌组织中CLDN-3和CLDN-4的mRNA表达水平.构建质粒pC-CPE-ETA′,转入E.coli BL21(DE3)plysS细菌中,获得重组融合蛋白C-CPE-ETA′的表达,经His-Bind树脂色谱柱纯化.应用考马斯蓝电泳和Western blot方法,验证重组融合蛋白C-CPE-ETA′成功表达、纯化.应用流式细胞仪、JC-1染色和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,在CLDN-3和CLDN-4高表达卵巢癌细胞中分别枪测C-CPE-ETA′的特异性膜结合能力、促凋亡及细胞毒作用.结果 real-time RT-PCR结果显示,卵巢癌细胞CAOV3、OVCAR3和SKOV3高表达CLDN-3和CLDN-4.20例上皮性卵巢癌组织中分别有18例高表达CLDN-3,12例高表达CLDN-4.考马斯蓝电泳和Western blot检测到相对分子质量为58 000的重组融合蛋白C-CPE-ETA′被表达并纯化.C-CPE-ETA′蛋白能够特异性结合到CLDN-3和CLDN-4高表达的卵巢癌细胞CAOV3、OVCAR3和SKOV3,进而引起促凋亡和细胞毒作用,C-CPE-ETA′蛋白对卵巢癌细胞CAOV3、OVCAR3和SKOV3的IC50值分别为7.364、8.110和22.340ng/ml,而对CLDN-3和CLDN-4缺乏表达的HUVEC细胞,即使C-CPE-ETA′浓度达10μg/ml也无明显细胞毒作用.结论 重组融合蛋白C-CPE-ETA′对CLDN-3和CLDN-4高表达的卵巢癌细胞具有显著的特异性细胞毒作用,为卵巢癌靶向治疗新策略提供了实验基础.
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