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摘要:建立HPLC测定荷叶配方颗粒中荷叶碱含量的方法。方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27:70.6:1.6:0.8)为流动相;流速:1ml/min;检测波长为270nm;柱温:30℃。理论板数按荷叶碱峰计应不低于2000。结果:荷叶碱在0.0408~0.3072g 范围内具有良好的线性关系,r= 0.9999,平均回收率为97.39%,RSD=2.04%(n=6)。结论:本法简便、准确,灵敏度高,重复性好,可用于荷叶成分的含量测定。
关键词:荷叶 高效液相色谱 含量
中图分类号:R151 文献标识码:A 文章编号:1672-5336(2014)04-0022-02
荷叶为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn的叶。属于“既是食品又是药品”的物品,其在食用及药用两方面均有较广泛的应用[1],具清热解暑、升发清阳、凉血止血之功[2-4]。《本草纲目》载“荷叶服之,令人瘦劣”[5]。民间有用荷叶治疗肥胖症的记载[6]。荷叶富含生物碱和黄酮类两大主要活性成分[7-9]。现代研究显示荷叶碱为荷叶中的主要降脂活性成分。荷叶配方颗粒是以荷叶饮片为原料,经过提取、分离、浓缩、干燥、制粒、包装等生产工艺,加工制成的一种新型配方用药,本实验采用高效液相色谱技术,对荷叶配方颗粒中的荷叶碱进行了含量测定。以期为荷叶资源进一步的开发和利用提供帮助。
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪:Agilent Technologies 1260 Infinity高效液相色谱仪。
荷叶碱化学对照品:购自中国药品生物制品检定所提供,批号:111566-201208,规格:20mg。其他所用试剂均为色谱纯和分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液制备
取荷叶碱对照品10.2mg,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得荷叶碱对照品的储备液;吸取1ml储备液,置于10ml量瓶中,加甲醇定容,即得(每1ml含荷叶碱20.4g)。
2.1.2 供试品溶液制备
取荷叶干膏适量,研磨,精密称取0.5g,置具塞三角烧瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞后称定重量,超声处理30分钟,取出放冷后,称定,补足减失的重量,滤过,取续滤液5ml,置10ml量瓶中,加甲醇,摇匀,即得。
2.2 色谱条件
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(依利特 4.6mm×250mm)。流动相:乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27:70.6:1.6:0.8)。检测波长:270nm。流速:1ml/min。柱温:30℃。理论板数:按荷叶碱峰计,应不低于2000。
2.3 线性关系考察
精密吸取系列对照品溶液依次为2ul、4ul、8ul、12ul、16ul、18ul,注入液相色谱仪中,并以进样量(g)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性关系考察,并绘制标准曲线,计算回归方程:y=3959.2x-5.3897,r=0.9999,说明荷叶碱在0.0408~0.3072g范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度考察
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20l,连续进样6次,依法测定,记录峰面积积分值,计算,考察精密度,叶碱峰面积的平均值为1739.517,RSD为0.34%。
2.5 稳定性考察
精密吸取同一供试品溶液及对照品溶液各20l,每隔一定时间分别注入液相色谱仪,依法测定,以荷叶碱峰面积积分值为指标,进行稳定性考察。结果显示对照品溶液和供试品溶液在24小时内测定结果的RSD值分别为0.52%、1.62%,表明荷叶碱的稳定性良好,即24小时内测定结果可靠。
2.6 重复性试验
精密称取同一批样品6份,按供2.1.2溶液项下制备,独立测定,计算样品含量用以考察重复性,以荷叶碱含量为测定指标,考察本法重现性,结果显示RSD值为2.46%,平均含量为0.3463mg/g,表明该方法重现性良好。
2.7 加样回收率
精密称取测定的已知含量样品6份,分别精密加入对照品适量,依法测定,计算回收率,结果显示平均回收率为 97.39%,RSD值为2.04%,表明本法准确性较好,方法可行。
2.8 样品含量测定
取十批样品(每袋1g),依法制备供试品溶液,每批二份,分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20l,注入液相色谱仪,测定峰面积,计算十批样品中荷叶碱含量。
3 讨论
溶剂提取的过程是由润湿、渗透、解吸、溶解及扩散、置换等几个相互联系的作用综合而成。对药材进行提取时,药材经粉碎后,一部分细胞会破裂,其中成分可直接扩散到溶剂中,但大部分细胞在粉碎后仍保持完整,提取溶剂需要穿透细胞壁进入到细胞质中将成分浸出,因此荷叶药材在含量测定的供试品溶液即采用热提法,目的是提高提取效率,以保证指标成分的溶出率。因此供试品溶液Ⅱ的提取方法拟以甲醇作为提取溶剂,采用超声提取法代替加热回流提取,达到即可保证有效成分的提取率,又能使检验过程更方便快捷。
参考文献
[1]李健英,华英圣,闰刚.菊荷冲剂对高脂血症大鼠血脂代谢的研究[J].中国中医药科技,1998,5(2):113-116.
[2]Ch P(中国药典) [S].VolⅠ.2000.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社版,2005:195.
[4]杨鹏,陈希平,文宁.HPLC法测定不同产地和采收期荷叶中芦丁和荷叶碱的含量[B].湖南中医药大学学报,30(3):37-40.
[5]蔡为荣.微波提取荷叶黄酮及其清除羟基自由基的研究[J].食品科学,2004,5(9):112-114.
[6]XuLa-ying(许腊英),LIUYun-gou(刘运苟),YE Ze-xiu(叶泽秀), ef al.Development and research of effect on lowering hyper-lipemia of Nelumbo nucifera leaves(荷叶降血脂的开发研究).Hubei J Tradit Chin med(湖北中医杂志),1996,18(1):42.
[7]黄阿根,施洪飞,韦红,等.荷叶黄酮和生物碱的提纯及调节血脂作用比较[J].扬州大学烹饪学报,2006,(3):23-25.
[8]Min Hu,Leif H.Skibsted.Antioxidative capacity of rhizome ex-tract and rhizome knot extract of edible lotus(Nelumbo nufieera)[J].Food Chem,2002,76:327-333.
[9]邓胜国,邓泽元,黄丽.荷叶黄酮体外抗氧化活性的研究[J].食品科技,2006,(7):274-276.
关键词:荷叶 高效液相色谱 含量
中图分类号:R151 文献标识码:A 文章编号:1672-5336(2014)04-0022-02
荷叶为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn的叶。属于“既是食品又是药品”的物品,其在食用及药用两方面均有较广泛的应用[1],具清热解暑、升发清阳、凉血止血之功[2-4]。《本草纲目》载“荷叶服之,令人瘦劣”[5]。民间有用荷叶治疗肥胖症的记载[6]。荷叶富含生物碱和黄酮类两大主要活性成分[7-9]。现代研究显示荷叶碱为荷叶中的主要降脂活性成分。荷叶配方颗粒是以荷叶饮片为原料,经过提取、分离、浓缩、干燥、制粒、包装等生产工艺,加工制成的一种新型配方用药,本实验采用高效液相色谱技术,对荷叶配方颗粒中的荷叶碱进行了含量测定。以期为荷叶资源进一步的开发和利用提供帮助。
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪:Agilent Technologies 1260 Infinity高效液相色谱仪。
荷叶碱化学对照品:购自中国药品生物制品检定所提供,批号:111566-201208,规格:20mg。其他所用试剂均为色谱纯和分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液制备
取荷叶碱对照品10.2mg,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得荷叶碱对照品的储备液;吸取1ml储备液,置于10ml量瓶中,加甲醇定容,即得(每1ml含荷叶碱20.4g)。
2.1.2 供试品溶液制备
取荷叶干膏适量,研磨,精密称取0.5g,置具塞三角烧瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞后称定重量,超声处理30分钟,取出放冷后,称定,补足减失的重量,滤过,取续滤液5ml,置10ml量瓶中,加甲醇,摇匀,即得。
2.2 色谱条件
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(依利特 4.6mm×250mm)。流动相:乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27:70.6:1.6:0.8)。检测波长:270nm。流速:1ml/min。柱温:30℃。理论板数:按荷叶碱峰计,应不低于2000。
2.3 线性关系考察
精密吸取系列对照品溶液依次为2ul、4ul、8ul、12ul、16ul、18ul,注入液相色谱仪中,并以进样量(g)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性关系考察,并绘制标准曲线,计算回归方程:y=3959.2x-5.3897,r=0.9999,说明荷叶碱在0.0408~0.3072g范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度考察
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20l,连续进样6次,依法测定,记录峰面积积分值,计算,考察精密度,叶碱峰面积的平均值为1739.517,RSD为0.34%。
2.5 稳定性考察
精密吸取同一供试品溶液及对照品溶液各20l,每隔一定时间分别注入液相色谱仪,依法测定,以荷叶碱峰面积积分值为指标,进行稳定性考察。结果显示对照品溶液和供试品溶液在24小时内测定结果的RSD值分别为0.52%、1.62%,表明荷叶碱的稳定性良好,即24小时内测定结果可靠。
2.6 重复性试验
精密称取同一批样品6份,按供2.1.2溶液项下制备,独立测定,计算样品含量用以考察重复性,以荷叶碱含量为测定指标,考察本法重现性,结果显示RSD值为2.46%,平均含量为0.3463mg/g,表明该方法重现性良好。
2.7 加样回收率
精密称取测定的已知含量样品6份,分别精密加入对照品适量,依法测定,计算回收率,结果显示平均回收率为 97.39%,RSD值为2.04%,表明本法准确性较好,方法可行。
2.8 样品含量测定
取十批样品(每袋1g),依法制备供试品溶液,每批二份,分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20l,注入液相色谱仪,测定峰面积,计算十批样品中荷叶碱含量。
3 讨论
溶剂提取的过程是由润湿、渗透、解吸、溶解及扩散、置换等几个相互联系的作用综合而成。对药材进行提取时,药材经粉碎后,一部分细胞会破裂,其中成分可直接扩散到溶剂中,但大部分细胞在粉碎后仍保持完整,提取溶剂需要穿透细胞壁进入到细胞质中将成分浸出,因此荷叶药材在含量测定的供试品溶液即采用热提法,目的是提高提取效率,以保证指标成分的溶出率。因此供试品溶液Ⅱ的提取方法拟以甲醇作为提取溶剂,采用超声提取法代替加热回流提取,达到即可保证有效成分的提取率,又能使检验过程更方便快捷。
参考文献
[1]李健英,华英圣,闰刚.菊荷冲剂对高脂血症大鼠血脂代谢的研究[J].中国中医药科技,1998,5(2):113-116.
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[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社版,2005:195.
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[5]蔡为荣.微波提取荷叶黄酮及其清除羟基自由基的研究[J].食品科学,2004,5(9):112-114.
[6]XuLa-ying(许腊英),LIUYun-gou(刘运苟),YE Ze-xiu(叶泽秀), ef al.Development and research of effect on lowering hyper-lipemia of Nelumbo nucifera leaves(荷叶降血脂的开发研究).Hubei J Tradit Chin med(湖北中医杂志),1996,18(1):42.
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[8]Min Hu,Leif H.Skibsted.Antioxidative capacity of rhizome ex-tract and rhizome knot extract of edible lotus(Nelumbo nufieera)[J].Food Chem,2002,76:327-333.
[9]邓胜国,邓泽元,黄丽.荷叶黄酮体外抗氧化活性的研究[J].食品科技,2006,(7):274-276.