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目的：采用网络药理学和体内实验验证的方法探讨温肾通络止痛方治疗原发性骨质疏松症的潜在作用机制。方法：选择TCMSP、TCMID、BATMAN-TCM与OMIM、GeneCards数据库筛选温肾通络止痛方治疗原发性骨质疏松症的有效活性成分及靶标基因；利用Cytoscape 3.7. 2建立其网络关系图；通过STRING在线分析平台构建PPI网络并运用Network Analyzer拓扑学分析进一步筛选核心靶点；借助DAVID进行GO和KEGG富集分析，筛选具有统计学差异的GO过程与KEGG通路（P ＜0.05）。以去卵巢的方式建立原发性骨质疏松症模型，21只SPF级C57BL/6J雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、温肾通络止痛方组，假手术组切除卵巢周围相等质量的脂肪组织，模型组和温肾通络止痛方组切除双侧卵巢；灌胃相应药物8周后，苏木素-伊红（HE）染色观察股骨组织形态学变化，酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组小鼠血清IL-6、TNF-α的表达水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测IL-6、TNF-α、Runx2 mRNA的表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测p-ERK、ERK、p-JNK、JNK的蛋白表达。结果：网络药理学方法筛选出温肾通络止痛方防治原发性骨质疏松症的有效活性成分包括山柰酚、槲皮素、木犀草素等203个，靶标基因包括IL-6、TNF-α、MAPK8等154个。KEGG富集分析预测温肾通络止痛方主要通过PI3K/Akt、TNF、MAPK等信号通路发挥抗骨质疏松作用。HE染色结果显示，与假手术组比较，模型组小鼠骨小梁稀疏，骨髓腔间隙较大，温肾通络止痛方可改善模型小鼠骨小梁密度，减小骨髓腔间隙。与模型组比较，温肾通络止痛方能够降低模型小鼠血清中IL-6、TNF-α的表达水平（P ＜0.01），降低IL-6、TNF-αmRNA表达（P ＜0.01），升高Runx2的mRNA的表达（P ＜0.01），并同时降低p-ERK/ERK、p-JNK/JNK的蛋白表达（P ＜0.05,P ＜0.01）。结论：温肾通络止痛方治疗原发性骨质疏松症具有多成分、多靶点、多途径的特点，可能通过IL-6、TNF-α靶点调控MAPK信号通路影响炎症反应等来发挥防治原发性骨质疏松症的作用。