研究微RNA(miR)-124a对RA滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。
方法从滑膜组织分离培养RASFs,实时荧光定量反转录(qRT)-PCR检测RASFs中AKT2 mRNA和miR-124a的表达,蛋白质印迹法检测AKT2蛋白表达水平,RASFs转染miR-124a,anti-miR-124a,si-AKT2或pcDNA-AKT2以上调或下调miR-124a和AKT2蛋白表达水平,细胞分为正常滑膜组织组,对照组,miR-con组,miR-124a,si-con组,si-AKT2组,miR-124a+pcDNA组,miR-124a+pcDNA-AKT2组。四氮唑蓝(MTT)法测定RASFs细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭细胞数,双荧光素酶报告系统验证miR-124a与AKT2之间的调控关系。采用独立样本t检验、单因素方差分析(方差齐)进行统计学分析。
结果①与正常滑膜组织组相比,RA患者滑膜组织中的miR-124a表达量(0.92±0.19)显著下降(t=5.788,P<0.01),AKT2 mRNA表达量(3.15±0.63)显著升高(t=-3.486,P=0.025),AKT2蛋白表达量(2.09±0.64)显著升高(t=-2.959,P=0.042)。②与对照组、miR-con组相比,miR-124a组的miR-124a表达量(4.17±0.46)显著上升(F=131.830,P<0.01),迁移细胞数(34±6)显著下降,侵袭细胞数(14.5±3.1)显著下降(F1=35.788,F2=27.211,P<0.01)。③与miR-con组(1.02±0.18)相比,miR-124a组的野生型WT-AKT2的萤火虫荧光素酶相对活性(0.31±0.11)显著下降(t=5.830,P<0.01)。④与对照组、si-con组相比,si-AKT2组的AKT2蛋白表达量(0.97±0.03)显著下降(F=128.056,P<0.01),迁移细胞数(32±4)显著下降,侵袭细胞数(18.6±2.2)显著下降(F1=70.082,F2=36.524,P<0.01)。⑤与miR-con组相比,miR-124a组的AKT2蛋白表达量(0.21±0.03)显著下降;与miR-124a+pcDNA组相比,miR-124a+pcDNA-AKT2组的AKT2蛋白表达量(0.51±0.06)显著上升(F=52.487,P<0.01)。⑥与miR-con组相比,miR-124a组RASFs迁移细胞数(30.5±4.6)和侵袭细胞数(12.5±1.8)显著下降;与miR-124a+pcDNA组相比,miR-124a+pcDNA-AKT2组的RASFs迁移细胞数(71±4)和侵袭细胞数(26.4±4.5)显著上升(F1=30.957,F2=49.960,P<0.01)。
结论miR-124a通过靶向AKT2基因表达调控RASFs细胞增殖、迁移和侵袭,miR-124a有望成为RA分子诊断和治疗的靶点。