【摘 要】
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目的:通过增加白念珠菌细胞壁通透性改良传统醋酸锂转化法的质粒转化率。方法:重组质粒经酶切线性化后,分别检测不同二甲基亚砜(DMSO)浓度(1%、5%和10%)化学处理和热休克时间
【机 构】
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南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室南京医科大学口腔医学院,
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目的:通过增加白念珠菌细胞壁通透性改良传统醋酸锂转化法的质粒转化率。方法:重组质粒经酶切线性化后,分别检测不同二甲基亚砜(DMSO)浓度(1%、5%和10%)化学处理和热休克时间梯度(0.5、2.0、3.0和4.0 h)白念珠菌的质粒转化率,筛选最适宜DMSO浓度及热休克时间,构建改良醋酸锂转化法。随后,采用选择性培养法和PCR验证比较传统醋酸锂转化法及改良醋酸锂转化法白念珠菌的质粒转化率。结果:发现采用5%的DMSO化学处理和将42℃热休克时间调整为3 h后阳性克隆子数量增多最明显。改良醋酸锂转化法的的白念珠菌质粒转化率为1.5×105阳性克隆子/1μg质粒DNA/108个细胞,而传统醋酸锂转化法转化率为0.6×105阳性克隆子/1μg质粒DNA/108个细胞。改良醋酸锂转化法的转化率明显高于传统醋酸醋酸锂转化法,两种方法质粒转化率的统计学比较存在显著性差异。结论:增加二甲基亚砜化学处理和调整热休克时间的改良醋酸锂转化法可以显著提高白念珠菌质粒转化率。
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