【摘 要】
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本研究通过进一步完善和简化"去透明带双半卵体细胞克隆牛技术",探讨了生产应用的可能性.结果表明:(1)在卵母细胞体外成熟发育的特定阶段(17～20 h间)采用分期分批显微盲吸法去
【机 构】
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广西大学,加拿大国际新技术发展集团
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本研究通过进一步完善和简化"去透明带双半卵体细胞克隆牛技术",探讨了生产应用的可能性.结果表明:(1)在卵母细胞体外成熟发育的特定阶段(17～20 h间)采用分期分批显微盲吸法去核,去核率可高达95%以上;(2)一次同时将2枚去核后的半卵和1枚供核体细胞粘合在一起,可大大提高电击融合效率;(3)克隆重构胚在DMAP中激活时间从4 h延长至16 h 仍有较高的卵裂率和囊胚率;(4)利用OPS法玻璃化冷冻保存牛体细胞克隆胚胎,解冻后胚胎可用率极显著地高于常规慢速冷冻法;(5)利用改进后的体细胞核移植程序工厂化批量生产牛体细胞克隆胚胎,获得88.2%(2575/2920)卵裂率、41.6%(1215/2920)囊胚率、75.4%(916/1215)冻胚率,冷冻胚胎移植后30 d妊娠率为28.1%(48/171).结果说明,本研究的牛去透明带双半卵体细胞核移植技术已可达到克隆胚胎批量生产应用的水平.
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