【摘 要】
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目的 体外构建含有人4-IBBL基因的重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 设计一对含有Sfil酶切位点的4-1BBL因上下游引物,以质粒pCR4-TOP0-4-1BBL为模板,通过PC
【机 构】
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中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所
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目的 体外构建含有人4-IBBL基因的重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 设计一对含有Sfil酶切位点的4-1BBL因上下游引物,以质粒pCR4-TOP0-4-1BBL为模板,通过PCR扩增获得4-1BBL基因全序列.片段回收后经酶切处理,连接到穿梭质粒pShuttle-CMV-EGFP上,获得重组穿梭质粒pShuttle-ECFP-4-1BBL.经Sfil酶切、PCR及插入片段测序鉴定正确后,将其用I-Ceul和I-Scel双酶切处理,转移到pAdxsi载体上,得到pAdxsi-GFP-4-1BBL病毒质粒,PCR鉴定正确后,经HEK293细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-4-1BBL,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测目的 基因人4-1BBL的表达.结果 酶切鉴定和序列分析证实,重组腺病毒质粒含有人4-1BBL全长cDNA编码序列,病毒滴度为1.2×10
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