论文部分内容阅读
目的 构建携载大鼠弹力蛋白原(tropoelastin)基因的重组腺病毒载体,并在体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中表达.方法 利用基因重组技术将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pShuttleTropoelastin-GFP进行同源重组,筛选出重组黏粒pAdTropoelastin-GFP,经过包装、扩增、纯化后获得重组腺病毒AdTropoelastin-GFP,测定病毒滴度.腺病毒体外感染大鼠主动脉平滑肌细胞,一步法提取细胞总RNA,逆转录后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测tropoelastin的mRNA.结果 得到了携载tropoelastin基因的重组腺病毒,纯化后滴度为5×1011 pfu/ml,腺病毒转染VSMC后1、3 d tropoelastin mRNA表达较空病毒明显增高(P＜0.01),并超出空病毒转染组2倍以上.结论 成功构建了携带tropoelastin的重组腺病毒载体,体外转染的VSMC有效表达目的基因。