【摘 要】
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半合成人肿瘤坏死因子TNF-α在大肠杆菌中高表达.发酵后收集菌体经超声破碎,然后在12000r/min4℃离心10min,上清经60℃热处理30min,离心上清用60%饱和度的硫酸铰沉淀,再依次经过SephadexG—25、DEAE—52纤维素和SephadexG—75柱层析,得到的纯化
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半合成人肿瘤坏死因子TNF-α在大肠杆菌中高表达.发酵后收集菌体经超声破碎,然后在12000r/min4℃离心10min,上清经60℃热处理30min,离心上清用60%饱和度的硫酸铰沉淀,再依次经过SephadexG—25、DEAE—52纤维素和SephadexG—75柱层析,得到的纯化rhTNF—α比活性为2×107u/mg,回收率为24%.经过SDS—PAGE电泳和HPLC鉴定,纯度达95%左右,分子量为17×103.rhTN—α对热稳定性试验表明,—20℃下贮存一年或者0℃下贮存一个月,rhTNF—α活性仍保留50%.人胃癌和肝癌细胞株的体外抑瘤试验和接种小鼠的活体抑瘤试验表明,本实验取得的rhTNF—α具有明显的抑瘤生长作用.
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