【摘 要】
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以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),将半抗原和载体蛋白偶联后免疫Balb/C小鼠,应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗氨基脲的杂交瘤细胞株。常规制备腹水,用
【基金项目】
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“十一五”攻关项目(2006BAD03B04-06)
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以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),将半抗原和载体蛋白偶联后免疫Balb/C小鼠,应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗氨基脲的杂交瘤细胞株。常规制备腹水,用辛酸-硫酸铵法纯化,并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化,建立检测氨基脲的间接竞争ELISA方法。利用对醛基苯甲酸衍生草鱼肌肉提取的氨基脲,用建立的ELISA方法进行检测,并计算回收率和最低检测限。经细胞融合、筛选及克隆化,共获得7株稳定分泌抗氨基脲的杂交瘤细胞株,其中4株亲和力较高。建立了间接竞争ELISA检测方法,该方法灵敏度达到0.1ng/mL,平均回收率为98.47%,在草鱼组织中的最低检测限为0.76ng/g,回收率为70.55-100.56%,可用于肌肉中氨基脲残留的检测。
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