【摘 要】
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利用原核表达的柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白(EtRP)的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O融合,经间接ELISA和Western blot筛选获得
【机 构】
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新疆农业大学动物医学学院,中国农业科学院上海兽医研究所
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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利用原核表达的柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白(EtRP)的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O融合,经间接ELISA和Western blot筛选获得一株抗EtRP蛋白的特异性单克隆抗体细胞株,命名为2E3,亚类鉴定为IgG2a.细胞上清和小鼠腹水的效价分别为1:40和1:2.56×104.利用该单抗对EtRP在柔嫩艾美耳球虫子孢子中的分布进行分子定位,结果显示该蛋白主要分布于子孢子的顶端;而当子孢子在DMEM培养基中41℃孵育1 h后,该蛋白则分布于整个虫体.研究结果表明,成功制备了EtRP单克隆抗体,为进一步研究球虫相关蛋白功能奠定了基础.
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