【摘 要】
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目的:研究miR-200b对胃癌MGC-803细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达的调节作用,探讨miR-200b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响.方法:用人工合成的miR-200b相应的双链互补DNA片段,插入miRNA
【机 构】
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湖南省桑植县人民医院消化内科,南华大学附属第二医院湘潭医院消化内科,株洲化工厂总医院,南华大学附属第二医院消化内科,湖南省浏阳市人民医院
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目的:研究miR-200b对胃癌MGC-803细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达的调节作用,探讨miR-200b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响.方法:用人工合成的miR-200b相应的双链互补DNA片段,插入miRNASelectTM pEGP-miR载体,经测序鉴定后作为microRNA的表达质粒;用脂质体将miR-200b高表达质粒转染进MGC-803胃癌细胞,经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆.构建Bcl-2高表达质粒,转染入MGC-803胃癌细胞和含有miR-200b高表达质粒的MGC-803细胞中.用RT-PCR技术和Western blot方法分别检测Bcl-2的mRNA和蛋白表达;用MTT法检测胃癌MGC-803细胞增殖的变化.结果:Western blot结果显示,与正常MGC-803细胞相比,转染了miR-200b的胃癌MGC-803细胞中,Bcl-2蛋白的表达降低了56.91%,RT-PCR分析显示Bcl-2mRNA表达降低了32.29%;MTT结果显示转染了miR-200b的细胞增殖受到显著抑制.进一步的实验结果显示,转染了Bcl-2高表达质粒的胃癌细胞增殖受到促进,48h最明显增加了16.82%,然而转染了miR-200b和Bcl-2高表达质粒的MGC-803细胞增殖却下降了7.97%;Western blot结果显示,与转染了pCMV6-XL5-Bcl-2高表达质粒的MGC-803细胞组相比,转染了pEGP-miR-200b高表达质粒的MGC-803细胞中Bcl-2蛋白的表达降低了4.84倍,而转染了pEGP-miR-200b和pCMV6-XL5-Bcl-2高表达质粒的MGC-803细胞中Bcl-2蛋白的表达量降低了1.76倍.结论:过表达的miR-200b抑制MGC-803胃癌细胞增殖,这种抑制作用至少部分与Bcl-2基因的低表达有关.
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