表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因酵母工程菌的构建及表达条件的优化

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：luodf

【摘要】

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【作者】

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江文正金宁一李子健韩文瑜

【机构】

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解放军军需大学基因工程重点实验室,吉林大学第一医院

【出处】

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中华微生物学和免疫学杂志

【发表日期】

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2002年22期

【关键词】

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酵母工程表达条件酵母表达毕赤酵母表达质粒 gaggp120 HIV1 抗原特异性嵌合基因目的蛋白

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目的构建表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的酵母工程菌,并优化表达条件. 方法将gag-gp120嵌合基因插入到酵母表达载体pHILS1中,构建了表达质粒pHILGP.线性化质粒电转化毕赤酵母菌GS115后进行整合,通过PCR及表达产物的SDS-PAGE和ELISA等方法筛选阳性酵母工程菌,并优化表达条件. 结果成功构建表达融合蛋白的酵母工程菌,表达量为13%左右.表达蛋白能与HIV-1阳性血清发生反应,但其相对分子质量(Mr)比预计计算的值要小.最佳表达条件为:BMMY培养基,85%溶解氧,培养时间3*!d,1%甲醇诱导浓度. 结论表达的融合蛋白具有很好的抗原特异性,存在于上清中,这有利于目的蛋白的分离纯化.

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