【摘 要】
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根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)LV和VR-2332株的核苷酸序列,设计合成了1对特异性引物,对PRRSV四川分离株SCI和SC2进行RT-PCR,扩增出病毒ORF5基因.利用真核表达质粒peDNA3
【机 构】
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四川农业大学动物科技学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室,内蒙古农业大学动物科学与医学院
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根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)LV和VR-2332株的核苷酸序列,设计合成了1对特异性引物,对PRRSV四川分离株SCI和SC2进行RT-PCR,扩增出病毒ORF5基因.利用真核表达质粒peDNA3.1(+)成功构建了PRRSV四川分离株ORF5基因疫苗peDNA-PRRSV-SCI-ORF5和peDNA-PRRSV-SC2-ORF5.通过脂质体转染法和电穿孔转染法将pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5转染Marc-145细胞,间接免疫荧光技术跟踪监测ORF5基因的表迭情况,结果表明,脂质体转染法和电穿孔转染法分别在转染26 h和23 h后检测到ORF5基因特异性表达产物,且随着培养时间的延长,特异性表达产物增多,两者均在56 h达到高峰;这证明pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5在Marc-145细胞中已高效表达,为PRRSV基因疫苗在临床上应用提供了实验依据.
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