【摘 要】
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目的 构建一个新型的反向基因操作系统,并利用该技术获得流感病毒变异株.方法 用分子生物学方法把表达蛋白载体(pQBI50-BFP-fA1)和转录基因载体(pHH21)两个载体有机地整合,构建出既能表达病毒蛋白又能转录基因的单一载体(pPol-Ⅱ/Ⅰ);同时通过RT-PCR提取A/Ann Arbor/6/60病毒的cDNA,然后把8个病毒基因分别克隆到pPol-Ⅱ/Ⅰ载体;通过点变异和基因删除方法对
【机 构】
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310013,杭州,浙江省医学科学院生物工程研究所,310013,杭州,浙江省医学科学院生物工程研究所
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目的 构建一个新型的反向基因操作系统,并利用该技术获得流感病毒变异株.方法 用分子生物学方法把表达蛋白载体(pQBI50-BFP-fA1)和转录基因载体(pHH21)两个载体有机地整合,构建出既能表达病毒蛋白又能转录基因的单一载体(pPol-Ⅱ/Ⅰ);同时通过RT-PCR提取A/Ann Arbor/6/60病毒的cDNA,然后把8个病毒基因分别克隆到pPol-Ⅱ/Ⅰ载体;通过点变异和基因删除方法对M和NS基因进行改进;用细胞培养和细胞免疫染色法测定重组病毒的生物特征.结果 成功构建了由8个小质粒组成的转染细胞能力较强的一个新型反向基因操作系统.同时在M和NS基因上加以分子生物学的改进,并获得2个对温度敏感和增殖力低的新毒株.结论 一个改进型反向基因操作系统被成功建立,且利用这个系统拯救出2个流感变异株.这个系统不仅在流感病毒的分子基础研究而且将在减毒性活疫苗的研发上发挥重要作用.这2个流感变异株作为减毒性活疫苗的候选株具有较好的开发前景。
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