【摘 要】
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目的构建含有小鼠骨硬化蛋白(Sost)基因3’非编码区(UTR)的荧光素酶报告基因载体(pMIR-REPORTSOST UTR),利用原代培养的小鼠颅骨成骨细胞及M C3T3-E1小鼠前成骨细胞系,探究在
【基金项目】
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国家自然科学基金(81100757)
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目的构建含有小鼠骨硬化蛋白(Sost)基因3’非编码区(UTR)的荧光素酶报告基因载体(pMIR-REPORTSOST UTR),利用原代培养的小鼠颅骨成骨细胞及M C3T3-E1小鼠前成骨细胞系,探究在成骨分化过程中Sost基因表达所受到的转录后调控作用。方法成骨诱导C57BL/6小鼠原代颅骨成骨细胞及MC3T3-E1细胞,分别检测各细胞中Sost基因mRNA和蛋白的相对表达水平。采用PCR克隆Sost基因3’UTR区,连接到荧光素酶报告基因载体pMIR-REPORT上,命名构建重组载体为pMIR-REPORT-SOST UTR。将pMIR-REPORT-SOST UTR和pMIR-REPORT转染至颅骨成骨细胞、M C3T3-E1细胞及NIH3T3小鼠胚胎成纤维细胞中,根据转染质粒将细胞分为pMIR-REPORT-SOST UTR组和pMIR-REPORT组,检测各组细胞中荧光素酶的相对表达水平。结果成骨诱导小鼠颅骨成骨细胞及MC3T3-E1细胞Sost的mRNA水平较对照组均明显升高(P<0.05),而Sost的蛋白水平与对照组相比变化不大(P>0.05)。在小鼠颅骨成骨细胞及MC3T3-E1细胞中,pMIR-REPORT-SOST UTR转染组较pMIR-REPORT转染组的荧光素酶相对表达水平均有所下降(P<0.05),而在NIH3T3细胞中pMIR-REPORT转染组和pMIR-REPORT-SOST UTR转染组的荧光素酶相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了pMIR-REPORT-SOST UTR,且Sost基因的3’UTR区参与了具有细胞特异性的转录后调控。
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