【摘 要】
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目的 表达、纯化解脲脲原体(Uu)半胱氨酸脱硫酶(IscS),分析其免疫活性. 方法 构建解脲脲原体重组质粒pET28a-IscS,转化至E.coli BL21 (DE3),使用IPTG诱导目的蛋白表达.收集细
【机 构】
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南华大学附属郴州医院,湖南郴州423000;南华大学病原生物学研究所;郴州市第一人民医院;怀化市第一人民医院
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目的 表达、纯化解脲脲原体(Uu)半胱氨酸脱硫酶(IscS),分析其免疫活性. 方法 构建解脲脲原体重组质粒pET28a-IscS,转化至E.coli BL21 (DE3),使用IPTG诱导目的蛋白表达.收集细菌,裂解过夜后超声破碎、离心,分别取上清和沉淀进行12％ SDS-PAGE分析.采用最佳表达条件大量诱导目的蛋白表达,使用Ni-NTA柱纯化目的蛋白.用纯化的重组IscS蛋白免疫BALB/c小鼠,获得免疫血清,Western blot鉴定目的蛋白的免疫原性,采用ELISA和淋巴细胞增殖等方法分析重组IscS蛋白的免疫学活性. 结果 成功构建重组质粒pET28a-IscS,转化DE3后在37℃、IPTG终浓度0.8 mmol/L诱导6h为最佳诱导表达条件,目的蛋白表达量较大,12％ SDS-PAGE电泳检测其相对分子质量约为45.7×103,与预期大小相符合.亲和层析纯化得到单一条带的重组蛋白,Western blot和ELISA检测该蛋白,能刺激BALB/c小鼠产生高滴度的特异性抗体,且IgG2a抗体水平高于IgG1.重组IscS蛋白免疫小鼠能诱导脾淋巴细胞发生增殖反应,并产生高水平的IFN-γ,诱导以Th1为主的细胞免疫应答. 结论 重组表达的解脲脲原体半胱氨酸脱硫酶蛋白具有免疫原性,可望成为Uu蛋白疫苗靶点.
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