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【摘 要】 目的：建立香果健消片（蜘蛛香、草果、木香、糯米）中橙皮苷的测定方法。方法：采用HPLC法，PUXIANG C18色谱柱（4.6mm×200mm，5μm）；乙腈-1%冰醋酸水溶液（23∶[KG-*3/5]77）为流动相；检测波长为283nm；柱温为30℃。结果：采用的方法对香果健消片中橙皮苷的测定适用，橙皮苷在55.0～220.0μg范围内呈现良好的线性关系，相关系数r>0.999，加样回收率（n=6）为100.7%。结论：本法准确可靠，可行性及重复性好，可用于香果健消片的质量控制。
【关键词】 香果健消片；橙皮苷；高效液相色谱
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）09-0007-03
Abstract：Objective： To establish an HLPC method for determination of hesperidin in Xiangguo Jianxiao Tablets（Valeriana jatamansi Jones，Amomun tsao-ko Crevost et Lemaire，Aucklandia lappa Decne，Semen oryzae Glutinosae）.Methods： The determination was performed on a PUXIANG C18 colunn（4.6mm×200mm，5μm）with the mobile phase consisted of acetonitrile-1% acetic acid solution（23∶77）.Wavelength detection distributed at 283nm and the column temperature was 30℃.Results： The method is available for determination of hesperidin in Xiangguo Jianxiao Tablets.The linear ranges of hesperidin was 55.0-220.0μg（r>0.99） .Conclusion： The method is accurate，reliable and reproducible and can be used for quality control of Xiangguo Jianxiao Tablets.
Keywords：Xiangguo Jianxiao Tablets；hesperidin；HPLC
香果健消片是由蜘蛛香、木香、草果、糯米四味藥经提取加工制成的复方制剂，有健胃消食之功效，用于消化不良、气胀饱闷、食积腹痛、胸满腹胀。
该制剂中，蜘蛛香理气止痛、消食止泻、祛风除湿、镇惊安神为方中君药；木香行气止痛、健脾消食，草果燥湿温中、截疟除痰共为臣药；佐以糯米温补脾胃。蜘蛛香的成分为橙皮苷[1]；木香的成分为木香烃内酯和去氢木香烃内酯，草果的成分为挥发油，两者的有效成分在提取加工过程中的损失难以控制，无法保证成品转移率；糯米的成分为碳水化合物，其控制没有实质意义。因此，为了更好的控制产品的质量，保证临床用药的安全有效，故用高效液相色谱法对香果健消片中的橙皮苷进行定量测定研究。
1 仪器和试药
1.1 仪器 Agilent 1260型高效液相色谱仪，赛多利斯电子天平（BP211D）。
1.2 试药 橙皮苷对照品（批号为1107021-200613），来源于中国食品药品检定研究院，用前置五氧化二磷干燥器中减压干燥12h以上；香果健消片（批号为140501、140502、140601、140602、140701）为云南云河药业股份有限公司生产；甲醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯，J.T.Baker）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 PUXIANG C18色谱柱（4.6mm×200mm，5μm）； 乙腈-1%冰醋酸水溶液（23∶77）为流动相；流量为0.8ml/min；检测波长为283nm；柱温30℃。理论板数按橙皮苷计算应计算不低于2000。
2.2 对照品溶液的制备 取巳减压干燥12h以上的橙皮苷对照品适量，精密称定， 加甲醇适量制成每1ml含25μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的配制 取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置50ml的容量瓶中， 加甲醇适量，超声处理40min，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 专属性试验 取按香果健消片生产工艺制成缺蜘蛛香的阴性样品0.5g，按“2.3”项下方法制备的阴性对照液，按“2.1”项下方法测定，结果在与橙皮苷对照品色谱相应的保留时间处，供试品溶液色谱图中有吸收峰，而阴性对照色谱图中未显吸收峰，色谱图详见图1。
2.5 线性关系考察 取含量测定项下的对照品溶液2、4、5、6、8μl按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，橙皮苷的量为横坐标绘制标准曲线，结果见表1。
结果表明，在选定的测定量范围内，橙皮苷的检测量与峰面积具有良好的线性关系，相关系数r>0.999，可见橙皮苷在55.0～220.0μg范围内呈现良好的线性关系。
2.6 精密度考察 取上述对照溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，测定，橙皮苷含量分别为0.417mg/片、0.418mg/片、0.417mg/片、0.420mg/片、0.421mg/片、0.419mg/片，RSD为0.39%。结果表明，仪器具有良好的精密度。
2.7 重复性考察 取同一批号的样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液6份，分别按“2.1”项下色谱条件测定。橙皮苷的含量分别为0.419mg/片、0.418mg/片、0.420mg/片、0.421mg/片、0.419mg/片、0.418mg/片，RSD为0.28%，结果表明该方法重复性良好。 2.8 耐用性考察 为了考察测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，需对其进行了稳定性、不同检测波长、不同柱温、不同色谱柱的考察，以增加该检测项目的适用性。
2.8.1 稳定性实验 取同一供试品溶液5μl，分别于0、4、8、24h各进样一次，其峰面积积分别为171.519、170.028、171.917、170.277，其RSD为0.47%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.8.2 不同检测波长的比较 取同一供试品溶液5μl，分别在波长283nm、280nm下测定其含量，考察不同波长对橙皮苷测定的影响，橙皮苷的含量分别为0.422mg/片、0.421mg/片，RSD值为0.24%，表明波长有较小变动时，对橙皮苷的检测基本没有影响，结果稳定。
2.8.3 不同柱温比较 取同一供试品溶液5μl，分别在柱温30℃、35℃、40℃下测定其含量，考察不同柱温对橙皮苷测定的影响，其峰面积为0.425 mg/片、0.421 mg/片、0.421 mg/片， RSD值為0.55%，表明柱温有较小变动时，测定结果基本不受影响，结果稳定。
2.8.4 不同色谱柱的比较 取同一供试品溶液5μl，使用Thermo ODS C18色谱柱（Part Number：30105-254630 250×4.6mm，5μm）、PUXIANG C18色谱柱（P/N ：PUXIANG18，S/N：09253800 250×4.6mm，5μm）、Agilent C18色谱柱（PN990967-902 SN：USAHO30965 LN B12166 250×4.6mm，5μm）同步操作考察用不同色谱柱测定橙皮苷含量时的适用程度，橙皮苷的含量分别为：0.417 mg/片、0.417 mg/片、0.425 mg/片，结果RSD值为1.11%，表明在使用以上三种不同色谱柱时，对橙皮苷的检测基本无影响。
2.9 加样回收率试验 称取巳知含量的同一批香果健消片（批号为140602，含量为1482.5μg/g）0.25g，置50ml容量瓶中，分别精密加入对照品溶液（浓度为27.5μg/ml）25ml，加入甲醇至约40ml，按“2.2”项下供试品溶液的配制方法制备加样供试液。按“2.1”项一色谱条件进行测定，计算对照品回收率，结果见表2。
2.10 样品测定 取5个批号的样品，按“2.2”项下供试品制备方法，按“2.1”项下色谱条件测定，结果见表3。
3 讨论
3.1 指标成份的选择 香果健消片方中蜘蛛香为君药，其根茎具有丰富的药用价值，传统中医药认为其具有理气止痛、消炎止泻、祛风除湿、镇静安神等功效，可用于治疗脘腹胀痛、消化不良、腹泻、痢疾、风湿痹痛、蛇毒、失眠、肥胖等症。《中国药典》2010版一部记载通过测定缬草三酯和乙酰缬草三酯的含量控制蜘蛛香的质量，但因缬草三酯和乙酰缬草三酯的不稳定性，《中国药典》2010版增补版取消了相关含量测定，笔者查阅大量相关资料，发现蜘蛛香的主要化学成分有挥发油、环烯醚萜类和黄酮类等，橙皮苷是蜘蛛香的主要有效成分之一，且其含量高、稳定性好，故将橙皮苷作为香果健消片的指标成分来控制产品质量。
3.2 波长的选择 取橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1ml含25μg的溶液，在200～400nm波长处进行紫外扫描，橙皮苷在283nm处有最大吸收，故选择283nm作为橙皮苷的测定波长。
3.3 流动相的选择 本实验中曾分别采用乙腈-水（用磷酸调pH：3.00）（23∶77）[3]、甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）[2]、乙腈-水（含1%冰醋酸）（23∶77）[1]为流动相洗脱，结果以乙腈-水（含1%冰醋酸）（23∶77）洗脱时峰型良好，分离度好。
参考文献
[1]胡轶群，张如松.药用植物蜘蛛香化学成分及药理作用研究[J].中国现代药物应用，2009，3（24）：194-197.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：345-346.
[3]石晋丽，刘勇，肖培根.HPLC法测定不同产地蜘蛛香中橙皮苷的含量[J].中草药，2005，36（3）：449-450.
（收稿日期：2015.03.05）
【关键词】 香果健消片；橙皮苷；高效液相色谱
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）09-0007-03
Abstract：Objective： To establish an HLPC method for determination of hesperidin in Xiangguo Jianxiao Tablets（Valeriana jatamansi Jones，Amomun tsao-ko Crevost et Lemaire，Aucklandia lappa Decne，Semen oryzae Glutinosae）.Methods： The determination was performed on a PUXIANG C18 colunn（4.6mm×200mm，5μm）with the mobile phase consisted of acetonitrile-1% acetic acid solution（23∶77）.Wavelength detection distributed at 283nm and the column temperature was 30℃.Results： The method is available for determination of hesperidin in Xiangguo Jianxiao Tablets.The linear ranges of hesperidin was 55.0-220.0μg（r>0.99） .Conclusion： The method is accurate，reliable and reproducible and can be used for quality control of Xiangguo Jianxiao Tablets.
Keywords：Xiangguo Jianxiao Tablets；hesperidin；HPLC
香果健消片是由蜘蛛香、木香、草果、糯米四味藥经提取加工制成的复方制剂，有健胃消食之功效，用于消化不良、气胀饱闷、食积腹痛、胸满腹胀。
该制剂中，蜘蛛香理气止痛、消食止泻、祛风除湿、镇惊安神为方中君药；木香行气止痛、健脾消食，草果燥湿温中、截疟除痰共为臣药；佐以糯米温补脾胃。蜘蛛香的成分为橙皮苷[1]；木香的成分为木香烃内酯和去氢木香烃内酯，草果的成分为挥发油，两者的有效成分在提取加工过程中的损失难以控制，无法保证成品转移率；糯米的成分为碳水化合物，其控制没有实质意义。因此，为了更好的控制产品的质量，保证临床用药的安全有效，故用高效液相色谱法对香果健消片中的橙皮苷进行定量测定研究。
1 仪器和试药
1.1 仪器 Agilent 1260型高效液相色谱仪，赛多利斯电子天平（BP211D）。
1.2 试药 橙皮苷对照品（批号为1107021-200613），来源于中国食品药品检定研究院，用前置五氧化二磷干燥器中减压干燥12h以上；香果健消片（批号为140501、140502、140601、140602、140701）为云南云河药业股份有限公司生产；甲醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯，J.T.Baker）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 PUXIANG C18色谱柱（4.6mm×200mm，5μm）； 乙腈-1%冰醋酸水溶液（23∶77）为流动相；流量为0.8ml/min；检测波长为283nm；柱温30℃。理论板数按橙皮苷计算应计算不低于2000。
2.2 对照品溶液的制备 取巳减压干燥12h以上的橙皮苷对照品适量，精密称定， 加甲醇适量制成每1ml含25μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的配制 取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置50ml的容量瓶中， 加甲醇适量，超声处理40min，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 专属性试验 取按香果健消片生产工艺制成缺蜘蛛香的阴性样品0.5g，按“2.3”项下方法制备的阴性对照液，按“2.1”项下方法测定，结果在与橙皮苷对照品色谱相应的保留时间处，供试品溶液色谱图中有吸收峰，而阴性对照色谱图中未显吸收峰，色谱图详见图1。
2.5 线性关系考察 取含量测定项下的对照品溶液2、4、5、6、8μl按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，橙皮苷的量为横坐标绘制标准曲线，结果见表1。
结果表明，在选定的测定量范围内，橙皮苷的检测量与峰面积具有良好的线性关系，相关系数r>0.999，可见橙皮苷在55.0～220.0μg范围内呈现良好的线性关系。
2.6 精密度考察 取上述对照溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，测定，橙皮苷含量分别为0.417mg/片、0.418mg/片、0.417mg/片、0.420mg/片、0.421mg/片、0.419mg/片，RSD为0.39%。结果表明，仪器具有良好的精密度。
2.7 重复性考察 取同一批号的样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液6份，分别按“2.1”项下色谱条件测定。橙皮苷的含量分别为0.419mg/片、0.418mg/片、0.420mg/片、0.421mg/片、0.419mg/片、0.418mg/片，RSD为0.28%，结果表明该方法重复性良好。 2.8 耐用性考察 为了考察测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，需对其进行了稳定性、不同检测波长、不同柱温、不同色谱柱的考察，以增加该检测项目的适用性。
2.8.1 稳定性实验 取同一供试品溶液5μl，分别于0、4、8、24h各进样一次，其峰面积积分别为171.519、170.028、171.917、170.277，其RSD为0.47%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.8.2 不同检测波长的比较 取同一供试品溶液5μl，分别在波长283nm、280nm下测定其含量，考察不同波长对橙皮苷测定的影响，橙皮苷的含量分别为0.422mg/片、0.421mg/片，RSD值为0.24%，表明波长有较小变动时，对橙皮苷的检测基本没有影响，结果稳定。
2.8.3 不同柱温比较 取同一供试品溶液5μl，分别在柱温30℃、35℃、40℃下测定其含量，考察不同柱温对橙皮苷测定的影响，其峰面积为0.425 mg/片、0.421 mg/片、0.421 mg/片， RSD值為0.55%，表明柱温有较小变动时，测定结果基本不受影响，结果稳定。
2.8.4 不同色谱柱的比较 取同一供试品溶液5μl，使用Thermo ODS C18色谱柱（Part Number：30105-254630 250×4.6mm，5μm）、PUXIANG C18色谱柱（P/N ：PUXIANG18，S/N：09253800 250×4.6mm，5μm）、Agilent C18色谱柱（PN990967-902 SN：USAHO30965 LN B12166 250×4.6mm，5μm）同步操作考察用不同色谱柱测定橙皮苷含量时的适用程度，橙皮苷的含量分别为：0.417 mg/片、0.417 mg/片、0.425 mg/片，结果RSD值为1.11%，表明在使用以上三种不同色谱柱时，对橙皮苷的检测基本无影响。
2.9 加样回收率试验 称取巳知含量的同一批香果健消片（批号为140602，含量为1482.5μg/g）0.25g，置50ml容量瓶中，分别精密加入对照品溶液（浓度为27.5μg/ml）25ml，加入甲醇至约40ml，按“2.2”项下供试品溶液的配制方法制备加样供试液。按“2.1”项一色谱条件进行测定，计算对照品回收率，结果见表2。
2.10 样品测定 取5个批号的样品，按“2.2”项下供试品制备方法，按“2.1”项下色谱条件测定，结果见表3。
3 讨论
3.1 指标成份的选择 香果健消片方中蜘蛛香为君药，其根茎具有丰富的药用价值，传统中医药认为其具有理气止痛、消炎止泻、祛风除湿、镇静安神等功效，可用于治疗脘腹胀痛、消化不良、腹泻、痢疾、风湿痹痛、蛇毒、失眠、肥胖等症。《中国药典》2010版一部记载通过测定缬草三酯和乙酰缬草三酯的含量控制蜘蛛香的质量，但因缬草三酯和乙酰缬草三酯的不稳定性，《中国药典》2010版增补版取消了相关含量测定，笔者查阅大量相关资料，发现蜘蛛香的主要化学成分有挥发油、环烯醚萜类和黄酮类等，橙皮苷是蜘蛛香的主要有效成分之一，且其含量高、稳定性好，故将橙皮苷作为香果健消片的指标成分来控制产品质量。
3.2 波长的选择 取橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1ml含25μg的溶液，在200～400nm波长处进行紫外扫描，橙皮苷在283nm处有最大吸收，故选择283nm作为橙皮苷的测定波长。
3.3 流动相的选择 本实验中曾分别采用乙腈-水（用磷酸调pH：3.00）（23∶77）[3]、甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）[2]、乙腈-水（含1%冰醋酸）（23∶77）[1]为流动相洗脱，结果以乙腈-水（含1%冰醋酸）（23∶77）洗脱时峰型良好，分离度好。
参考文献
[1]胡轶群，张如松.药用植物蜘蛛香化学成分及药理作用研究[J].中国现代药物应用，2009，3（24）：194-197.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：345-346.
[3]石晋丽，刘勇，肖培根.HPLC法测定不同产地蜘蛛香中橙皮苷的含量[J].中草药，2005，36（3）：449-450.
（收稿日期：2015.03.05）