目的 观察Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)在草酸所致的肾小管上皮细胞氧化损伤中的作用.方法 体外培养犬肾小管上皮细胞(MDCK细胞)制成爬片后,随机分为空白对照组(A组)、Rac1抑制组(B组)、草酸组(C组)、Rac1抑制+草酸组(D组).B组和D组分别暴露在含Rac1抑制剂NSC23766(100 μmol/L)培养液中,30 min后C组及D组分别更换为含草酸(5 mmol/L)的培养液,余对照更换为磷酸盐缓冲液(PBS).4h后分别测定各组培养液中过氧化氢(H2 O2)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性和细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶活性,免疫细胞化学染色观察细胞Rac1表达,向培养液中加入草酸钙(0.75 mmol/L)15 min后在倒置显微镜下观察细胞对草酸钙结晶的黏附.结果 A组H2O2浓度、LDH活性及细胞NADPH氧化酶活性分别为(24.23±2.44) mmol/L、(0.62 ±0.06) U/ml、(1 042.83±61.00) RLU/(min· mg);B组分别为(24.46±3.39) mmol/L、(0.56±0.06) U/ml、(1 096.67±66.12) RLU/(min· mg);C组分别为(67.84±4.25) mmol/L、(1.71 ±0.08) U/ml、(2 852.50±105.71) RLU/(min· mg);D组分别为(34.79±3.07) mmol/L、(0.96±0.07) U/ml、(1 118.83±57.56) RLU/(min· mg).与A组比较,C组细胞Rac1表达增强(P＜0.05),NADPH氧化酶活性、H2O2浓度、LDH活性明显增强(P＜0.05),细胞对草酸钙结晶的黏附数量增多;而与C组比较,D组细胞Rac1表达降低(P＜0.05),NADPH氧化酶活性、H2O2浓度、LDH活性均显著降低(P＜0.05),黏附在细胞表面的草酸钙结晶数量减少.结论 草酸通过Rac1调节的NADPH氧化酶致肾小管上皮细胞氧化损伤,抑制Rac1可显著减少活性氧物质的产生及细胞损伤。
Ras相关的C3肉毒素底物1在草酸所致的肾小管上皮细胞氧化损伤中的作用
【摘 要】
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目的 观察Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)在草酸所致的肾小管上皮细胞氧化损伤中的作用.方法 体外培养犬肾小管上皮细胞(MDCK细胞)制成爬片后,随机分为空白对照组(A组)、Rac1抑制组(B组)、草酸组(C组)、Rac1抑制+草酸组(D组).B组和D组分别暴露在含Rac1抑制剂NSC23766(100 μmol/L)培养液中,30 min后C组及D组分别更换为含草酸(5 mmol/L)的培
【机 构】
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【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2014年31期
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