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摘 要 目的：了解住院患者2年中大肠埃希氏菌，克雷伯氏菌EsBLs的检出率及对常用抗生素的耐药情况。方法：采用双纸片协同试验及纸片确证试验对2006～2007年分离的412株大肠埃希氏菌，134株克雷伯氏菌产超广谱β-内酰胺酶菌株检测，并采用纸片扩散法(K-B法)对产ESBLs菌株进行药敏试验。结果：大肠埃希氏菌产ESBLs分离率2006、2007年分别为33.3%、35.3%。耐药表型结果显示产ESBLs菌对抗生素耐药率明显高于非产ESBLs菌。结论：产ESBLs是大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌对β-内酰胺类抗生素耐药的重要机制，临床细菌室应对产ESBLs菌进行规范化监测与报告。
关键词 院内感染 超广谱β-内酰胺酶 大肠埃希氏菌克雷伯氏菌 耐药性doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2009.09.179
资料与方法
一般资料：来自我院住院患者2006～2007年分离的临床菌株，共收集大肠埃希氏菌(ECO)和克雷伯氏菌(KPN)共计546株。所用于质控的标准菌株肺炎克雷伯氏菌ATCC700603为ESBLs阳性质控菌，大肠埃希氏菌ATCC25922为ESBLs阴性质控菌，均来自卫生部药品生物检定所。
培养基：分离鉴定培养基和MH琼脂干粉购自杭州天和微生物试剂有限公司，细菌鉴定按《全国临床检验操作规程》进行。
药敏纸片：头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、氨曲南(ATM)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)、亚胺培南(IMP)、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸。
药敏试验：采用K-B法，判断标准按照NCCLSI1999年版规定进行以敏感(S)、中介(I)、耐药(R)报告结果。
ESBLs测定：①纸片协同试验：按纸片扩散法在M-H平板上涂布细菌，在平板中心贴上阿莫西林/克栓(AMC)纸片，距中心纸片25mm处分别贴上CRZ、CTX、ATM纸片，35℃孵育18～24小时观察结果，在中心纸片和CAZ、CTX、ATM3种纸片抑菌环间出现协同，则初步判断ESBLs阳性。②確证试验：在涂布待测菌的M-H平面上分别贴上CTX(30μg)、CAZ(30μg)、CTX/CLAV(30/10μg)、CAZ/CLAV(3/10μg)纸片，37℃培养18～24小时观察结果，即加克拉维酸和不加克拉维酸纸片的直径之差≥5mm，可确认为ESBLs菌株。
统计方法：采用WHONET-5软件系统。
结 果
ESBLs检出率：大肠埃希氏菌产ESBLs分离率2006、2007年分别为 33.3%、35.3%，克雷伯氏菌产ESBLs分离率2006、2007年分别为27.5%、35.5%。
ESBLs的耐药率：2006～2007产ESBLs大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌耐药性动态观察中发现氧氟沙星、替卡西林/克拉维酸、头孢西啶、头孢哌酮等抗菌药物的耐药性，不同时期有所不同，而青霉素类、头孢菌素类、单环类、氨基糖苷类、喹诺酮类以及加β-内酰胺酶抑制剂复合制剂等常用抗菌用药均高度耐药，而且表现为多重耐药。见表1。
讨 论
大肠埃希菌和克雷伯氏菌是产ESBLs的重要菌株，由于大量使用广谱的第三代头孢菌素等原因，近年来临床产ESBLs的细菌分布率逐渐增加，已成为临床感染重要致病菌，本院两年来临床标本培养分离出大肠埃希氏菌412株，ESBLs阳性率平均为34.3%，克雷伯氏菌134株，产ESBLs株平均为31.5%，和文献报道相同[1，2]，大肠埃希氏菌产酶率高于克雷伯氏菌。产ESBLs菌株对18种常用抗菌药物的敏感率明显低于不产ESBLs菌株，对第一、二代头孢菌素呈高度耐药，对第三代头孢菌素和氨曲南的耐药率也达到 38%～78%，但有58%的产ESBLs株对氨基糖苷类和碳青酶烯类敏感，因此，临床治疗ESBLs菌感染不宜选用第三代头孢菌素，宜选用氨基糖苷类和碳青酶烯类药物。由于许多的产ESBLs菌株在体外不表达酶的活性，体外药敏试验显示出对氨曲南等抗菌药物部分敏感，按照NccLs规定，对于产ESBLs菌株无论体外药敏试验结果如何，均应报告对青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等单酰胺类抗生素耐药，因此，实验室应注重ESBLs的检测，以提供正确的药敏试验报告，产ESBLs的菌株对亚胺培南的敏感率为100%，对于产ESBLs肠杆菌细菌重点感染的治疗亚胺培南可作为首选药物。
由于该菌具有多重耐药性和经质粒传播迅速等特点，很容易在细菌间传递播撒，导致对抗生素耐药的细菌个体传播，因此，给临床治疗带来了极大的困难，造成医疗费用增加，平均住院日延长，病死率增加，通过两年的检测，了解我院大肠埃希氏菌和克雷伯氏菌产ESBLs的产生情况，及时快速地检测出ESBLs，有利于指导临床医生及时合理应用抗菌药物，避免产ESBLs菌株的增多。
参考文献
1 吴安华,任南,文细毛,等.我国178所医院住院患者横断面抗菌药物使用调查.中华医院感染学杂志,2002,12(12):881-884.
2 彭少华,李从荣.施金玲,等.产超广谱β-内酰胺酶的检测与耐药性观察.中华检验医学杂志,2001,24(6):350-352.
关键词 院内感染 超广谱β-内酰胺酶 大肠埃希氏菌克雷伯氏菌 耐药性doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2009.09.179
资料与方法
一般资料：来自我院住院患者2006～2007年分离的临床菌株，共收集大肠埃希氏菌(ECO)和克雷伯氏菌(KPN)共计546株。所用于质控的标准菌株肺炎克雷伯氏菌ATCC700603为ESBLs阳性质控菌，大肠埃希氏菌ATCC25922为ESBLs阴性质控菌，均来自卫生部药品生物检定所。
培养基：分离鉴定培养基和MH琼脂干粉购自杭州天和微生物试剂有限公司，细菌鉴定按《全国临床检验操作规程》进行。
药敏纸片：头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、氨曲南(ATM)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)、亚胺培南(IMP)、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸。
药敏试验：采用K-B法，判断标准按照NCCLSI1999年版规定进行以敏感(S)、中介(I)、耐药(R)报告结果。
ESBLs测定：①纸片协同试验：按纸片扩散法在M-H平板上涂布细菌，在平板中心贴上阿莫西林/克栓(AMC)纸片，距中心纸片25mm处分别贴上CRZ、CTX、ATM纸片，35℃孵育18～24小时观察结果，在中心纸片和CAZ、CTX、ATM3种纸片抑菌环间出现协同，则初步判断ESBLs阳性。②確证试验：在涂布待测菌的M-H平面上分别贴上CTX(30μg)、CAZ(30μg)、CTX/CLAV(30/10μg)、CAZ/CLAV(3/10μg)纸片，37℃培养18～24小时观察结果，即加克拉维酸和不加克拉维酸纸片的直径之差≥5mm，可确认为ESBLs菌株。
统计方法：采用WHONET-5软件系统。
结 果
ESBLs检出率：大肠埃希氏菌产ESBLs分离率2006、2007年分别为 33.3%、35.3%，克雷伯氏菌产ESBLs分离率2006、2007年分别为27.5%、35.5%。
ESBLs的耐药率：2006～2007产ESBLs大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌耐药性动态观察中发现氧氟沙星、替卡西林/克拉维酸、头孢西啶、头孢哌酮等抗菌药物的耐药性，不同时期有所不同，而青霉素类、头孢菌素类、单环类、氨基糖苷类、喹诺酮类以及加β-内酰胺酶抑制剂复合制剂等常用抗菌用药均高度耐药，而且表现为多重耐药。见表1。
讨 论
大肠埃希菌和克雷伯氏菌是产ESBLs的重要菌株，由于大量使用广谱的第三代头孢菌素等原因，近年来临床产ESBLs的细菌分布率逐渐增加，已成为临床感染重要致病菌，本院两年来临床标本培养分离出大肠埃希氏菌412株，ESBLs阳性率平均为34.3%，克雷伯氏菌134株，产ESBLs株平均为31.5%，和文献报道相同[1，2]，大肠埃希氏菌产酶率高于克雷伯氏菌。产ESBLs菌株对18种常用抗菌药物的敏感率明显低于不产ESBLs菌株，对第一、二代头孢菌素呈高度耐药，对第三代头孢菌素和氨曲南的耐药率也达到 38%～78%，但有58%的产ESBLs株对氨基糖苷类和碳青酶烯类敏感，因此，临床治疗ESBLs菌感染不宜选用第三代头孢菌素，宜选用氨基糖苷类和碳青酶烯类药物。由于许多的产ESBLs菌株在体外不表达酶的活性，体外药敏试验显示出对氨曲南等抗菌药物部分敏感，按照NccLs规定，对于产ESBLs菌株无论体外药敏试验结果如何，均应报告对青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等单酰胺类抗生素耐药，因此，实验室应注重ESBLs的检测，以提供正确的药敏试验报告，产ESBLs的菌株对亚胺培南的敏感率为100%，对于产ESBLs肠杆菌细菌重点感染的治疗亚胺培南可作为首选药物。
由于该菌具有多重耐药性和经质粒传播迅速等特点，很容易在细菌间传递播撒，导致对抗生素耐药的细菌个体传播，因此，给临床治疗带来了极大的困难，造成医疗费用增加，平均住院日延长，病死率增加，通过两年的检测，了解我院大肠埃希氏菌和克雷伯氏菌产ESBLs的产生情况，及时快速地检测出ESBLs，有利于指导临床医生及时合理应用抗菌药物，避免产ESBLs菌株的增多。
参考文献
1 吴安华,任南,文细毛,等.我国178所医院住院患者横断面抗菌药物使用调查.中华医院感染学杂志,2002,12(12):881-884.
2 彭少华,李从荣.施金玲,等.产超广谱β-内酰胺酶的检测与耐药性观察.中华检验医学杂志,2001,24(6):350-352.