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目的通过观察兔角膜内皮细胞形态，了解不同保存方法和不同保存时期及时间点对角膜内皮细胞活性和密度的影响。方法采用短期湿房4℃保存6h、D—X角膜中期保存液4℃保存3d、长期深低温保存3个月，取3组各自限定时间的保存角膜片进行检测，分别行角膜内皮细胞茜素红和台盼蓝活性染色、光学显微镜观察及图像分析。结果长期深低温保存后的兔角膜内皮细胞活性率、细胞密度及六边形细胞率低于前两组，细胞面积高于前2组，均具有统计学差异。结论正确掌握3种方法，维持角膜内皮细胞生物活性，虽然深低温保存方法对角膜内皮细胞活性和密度有一定影