【摘 要】
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目的 分别将人类p100基因,p100 的SN基因片段和TD片段定向连入pERFP-CI质粒,使它们可与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,从而为进一步研究P100蛋白及其片段的定位、功能及
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目的 分别将人类p100基因,p100 的SN基因片段和TD片段定向连入pERFP-CI质粒,使它们可与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,从而为进一步研究P100蛋白及其片段的定位、功能及与其它蛋白的相互关系奠定实验基础.方法 PCR分别扩增出P100蛋白全长,SN片段和TD片段基因的序列,定向克隆至真核表达载体pERFP-CI, 构建相应的3种重组质粒.将构建成功的质粒转染入HeLa 细胞,荧光显微镜下可观察红色荧光融合蛋白表达.结果 ① PCR 法获得P100 基因序列, 长度为2 659 bp,SN基因片段1 918 bp,TD基因片段741 bp;②将重组质粒直接进行双酶切鉴定可见P100片段, 将经过蓝白斑筛选后的重组子经双酶切再与pERFP-CI载体连接并酶切得到SN片段和TD片段;③转染重组质粒后可观察到红色荧光蛋白的表达.结论 3种外源片段成功载入pERFP-CI质粒; P100全长、SN片段、TD片段均可与红色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达.
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