应用PCR技术构建人IL-4高效表达克隆

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qwe007wc
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在组建成功人白细胞介素4(hIL-4)表达质粒pBV220/hIL-4基础上,应用多聚酶链式反应(PCR)技术,我们构建成hIL-4高效表达克隆,命名为pBV220/hIL-4a。核苷酸序列分析证明该质粒去除了IL-4终止密码子TGA后200bp3′末端侧翼区核苷酸,且以定位突变技术改原终止密码TGA为原核系统强终止密码子TAA。新构建的表达质粒经SDS-PAGE及密度扫描分析结果表明:表达hIL-4蛋白分子量仍为15kD,产量占总菌体蛋白量的30-40%,较原克隆提高了2-4倍;用支持T细胞增殖的生物活性检测法,测出的hIL-4活性为5×107U/L菌,较原克隆提高了25倍。

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