【摘 要】
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背景:脾脏来源的树突状细胞诱导周期长,产量相对较少,相关报道亦较少。目的:建立简便的体外扩增小鼠脾脏树突状细胞的方法。设计、时间及地点:细胞形态学观察实验,于2007-02/
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背景:脾脏来源的树突状细胞诱导周期长,产量相对较少,相关报道亦较少。目的:建立简便的体外扩增小鼠脾脏树突状细胞的方法。设计、时间及地点:细胞形态学观察实验,于2007-02/09在华北石油总医院中心实验室完成。材料:健康BALB/C小鼠、C57小鼠及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素4。方法:无菌手术取C57小鼠脾脏,用1mL注射器抽取Hanks液,刺入脾脏并反复冲洗,获取单个核细胞,用0.1g/L粒-单核细胞集落刺激因子、白细胞介素4的H-DMEM培养,8d后即得成熟的树突状细胞。同时无菌取BABL/C小鼠脾脏制备单细胞悬液,收集非黏附细胞调整密度后作为反应细胞。再将两种细胞混合培养。主要观察指标:成熟树突状细胞的形态学观察,并对其表面CD11c,CD86及MHC-Ⅱ类分子进行检测。并计算两种细胞混合培养后的吸光度值。结果:体外诱导培养8d后获得大量成熟的树突状细胞,细胞表面具有典型的树枝状突起,高表达树突状细胞相对特异性表面分子CD11c(78.46%)、CD86(87.24%)及MHC-Ⅱ(92.65%),同时具有较强的刺激同种异基因混合淋巴细胞增殖的能力。结论:联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素体外诱导培养小鼠脾脏细胞,可生成大量功能成熟的树突状细胞。
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