【摘 要】
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目的 观察神经菌毛素-1(NRP-1)通过促进肝星状细胞(HSC)活化增殖进而对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法 构建NRP-1腺病毒载体pDC315-NRP-1-3 Flag,感染LX2细胞;Western blot检测NRP-1蛋白表达水平,细胞免疫化学法检测LX2中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及NRP-1表达水平;通过噻唑蓝(MTT)、Transwell间接共培养检测LX2及He
【机 构】
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710061西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科,710061西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科,710061西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科,710061西安交通大学医学院第一附属医院肝
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目的 观察神经菌毛素-1(NRP-1)通过促进肝星状细胞(HSC)活化增殖进而对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法 构建NRP-1腺病毒载体pDC315-NRP-1-3 Flag,感染LX2细胞;Western blot检测NRP-1蛋白表达水平,细胞免疫化学法检测LX2中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及NRP-1表达水平;通过噻唑蓝(MTT)、Transwell间接共培养检测LX2及HepG2细胞增殖能力,Transwell实验检测HepG2细胞侵袭和迁移能力.结果 构建人NRP-1基因重组过表达腺病毒pDC315-NRP-1-3Flag,最佳感染滴度为2.0×106 PFU/ml,48 h感染效率可达90％以上,Western blot示感染后LX2细胞NRP-1表达增高,转染48 h后NRP-1表达较高水平,细胞免疫化学显示转染组LX2的α-SMA及NRP-1表达增高.MTT检测显示NRP-1过表达组LX2增殖能力强于空载体组及未转染组,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞共培养实验证实LX2可促进HepG2的增殖、侵袭及迁移能力,NRP-1过表达组LX2对HepG2的促进作用更为明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人NRP-1基因重组腺病毒可稳定转染LX2细胞,NRP-1可促进LX2的活化及增殖,继而促进HepG2细胞增殖及侵袭、迁移能力。
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