【摘 要】
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目的 观察细胞内Ca+及MERTK基因在人视网膜色素上皮(RPE)细胞的吞噬功能中所起的作用及二者的相互关系.方法用视细胞外节膜盘(ROS)于37℃孵育培养的RPE细胞.在孵育不同终止吞
【机 构】
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中国医科大学附属第一医院眼科,沈阳,110001110001,沈阳,中国医科大学附属第一医院眼科;北京大学第三医院眼科中心;锦州市亚东眼科医院;
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目的 观察细胞内Ca+及MERTK基因在人视网膜色素上皮(RPE)细胞的吞噬功能中所起的作用及二者的相互关系.方法用视细胞外节膜盘(ROS)于37℃孵育培养的RPE细胞.在孵育不同终止吞噬反应.双重荧光标记法检测RPE细胞吞噬动力学;钙离子荧光探针负载法在荧光显微镜下测定RPE细胞内Ca2+的变化;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测相应时间点MERTK基因表达的变化及施加Ca2+激活剂(A23187载体)或拮抗剂(verapamile)后MERTK基因表达的变化.结果 RPE细胞与ROS孵育过程中,ROS结合于RPE细胞表面发生在15 rain时,RPE细胞吞噬ROS在24 h时达到饱和.细胞内Ca2+在孵育15 min时升高.并在24 h内保持高水平;MERTK基因表达在RPE细胞与ROS孵育5 min时增强,并在全部孵育过程中呈现出高表达状态;以A23187载体开放钙通道升高RPE细胞内Ca2+后,MERTK基因信使核糖核酸(Mrna)水平升高.并呈剂量依赖性.经A23187预处理后的孵育实验中所检测到的MERTK Mrna水平除3 h这一时间点外均高于对照组;vempamile拮抗RPE细胞内Ca2+后,MERTK基因表达明显下降并呈剂量依赖性;以verapamile预处理后继续与ROS孵育,所检测到的MERTK基因在24 h内均低于对照组.结论 MERTK基因及细胞内Ca2+发挥着维持RPE细胞吞噬过程的重要作用,MERTK作为上游调控信号启动下游的细胞内Ca2+信号来维持RPE细胞对ROS的摄入过程.
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