【摘 要】
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目的 表达并鉴定一种用于检测1型糖尿病的抗原蛋白质,探讨其在化学发光检测系统中的临床应用.方法 利用Primer 5.0软件设计引物,扩增谷氨酸脱羧酶65(GAD65)的部分蛋白质编码
【机 构】
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264200 山东威海,威海市立医院检验科;264200 山东威海,威海市立医院中心实验室;518122 广东深圳,深圳市新产业生物医学工程股份有限公司试剂生产部;518122 广东深圳,深圳市新产业
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目的 表达并鉴定一种用于检测1型糖尿病的抗原蛋白质,探讨其在化学发光检测系统中的临床应用.方法 利用Primer 5.0软件设计引物,扩增谷氨酸脱羧酶65(GAD65)的部分蛋白质编码区(CDS)并克隆至pFastBac1载体中,经测序验证后在SF9细胞中表达.采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定所得蛋白.利用该蛋白制备一种用于1型糖尿病检测的试剂盒,将其运用于化学发光检测系统,计算阳性检出率,并比较化学发光检测系统与蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)阳性检出率的差异.结果 成功表达了与GAD65抗体特异结合的抗原蛋白质,SDS-PAGE显示其相对分子质量为65000,与预测值相符;亲和层析纯化后蛋白纯度≥95％.所制备的化学发光检测试剂盒的阳性检出率明显高于Western blotting〔78.95％(30/38)比52.63％(20/38),P<0.05〕.结论 GAD65抗体特异结合抗原蛋白纯度高、特异性强,利用该蛋白制备的相应试剂盒可应用于化学发光检测系统,提高了GAD65抗体的阳性检出率和对1型糖尿病的诊断效率,避免传统检测方法的漏检,值得在临床推广.
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