探讨丁酸钠对RAW264.7细胞活性及破骨细胞分化的影响。
方法应用0、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mmol/L丁酸钠处理RAW264.7细胞,每种浓度设置3个复孔,细胞计数试剂盒-8检测其对RAW264.7细胞的毒性。活细胞染色液检测0、0.25、0.50、1.00 mmol/L丁酸钠对RAW264.7细胞凋亡的影响。应用破骨细胞分化因子将RAW264.7细胞诱导成破骨细胞,实验分为两组(n=3):诱导成熟后实验组加入1.00 mmol/L丁酸钠处理,对照组培养基中加入等体积溶剂,观察并比较两组破骨细胞的数量和骨再吸收区域面积。蛋白质免疫印迹法检测0、0.25、0.50、1.00 mmol/L丁酸钠对RAW264.7细胞中核因子活化B细胞κ-轻链增强子(NF-κB)相关信号通路的作用。
结果与0 mmol/L丁酸钠比较,1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mmol/L丁酸钠均可显著降低RAW264.7细胞的活性,差异均有统计学意义(P<0.05)。1.00 mmol/L丁酸钠处理RAW264.7细胞24 h后可以诱导细胞凋亡。对照组与实验组破骨细胞数量分别为9.33±2.08、4.67±1.16,差异有统计学意义(t=3.395,P=0.027);破骨细胞骨再吸收区域面积百分比分别为52.43%±5.38%、14.28%±2.72%,差异有统计学意义(t=10.970,P<0.001)。与其他浓度丁酸钠相比,1.00 mmol/L丁酸钠可使NF-κB激酶的α/β亚基磷酸化水平降低,细胞质中亚基p65含量增多,B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白、被剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达量及组蛋白H3的乙酰化均升高。
结论随着丁酸钠浓度的升高,NF-κB的活性随之受到抑制,RAW264.7细胞凋亡增多。1.00 mmol/L丁酸钠可减少破骨细胞的生成和骨再吸收区域面积。