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摘要：从海南省4个县（市）的香蕉基地采集的香蕉根结线虫病的32份土样和87份根样中鉴定出根结线虫属（Meloidogyne spp.）、肾形线虫属（Rotylenchulus spp.）、短体线虫属（Pratylenchus spp.）、茎线虫属（Ditylenchus spp.）、螺旋线虫属（Helicotylenchus spp.）、矮化线虫属（Tylenchorhynchus spp.）、真滑刃线虫属（Aphelenchu，spp.）7个属。其中根结线虫属和肾形线虫属分布较广，种群数量也较高，在各采样区中均有发生，是目前海南省香蕉生产中面临的最主要的病原线虫。
关键词：香蕉；根结线虫；海南地区；优势种群；根结线虫属；肾形线虫属
中图分类号： S436.68 1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）02-0128-02
收稿日期：2014-04-14
基金项目：海南大学青年基金（编号：qnjj1201）；海南省自然科学基金（编号：312060）。
作者简介：赵艳（1981—），女，山西太谷人，博士，讲师，主要从事微生物相关研究。E-mail：yanbo315@126.com。
通信作者：张晓波，博士，副教授，研究方向为草坪管理相关研究。E-mail：23065041@qq.com。根结线虫（Meloidogyne spp.）是一类在植物上危害极为严重的寄生线虫，是植物线虫中种类最多、分布最广和危害最严重的类群之一。海南省作为我国香蕉主产区，香蕉栽培面积不断扩大，取得了显著的经济效益[1-2]。近年来，由于气候条件及栽培管理等的影响，海南省香蕉根结线虫病的发生越来越严重，在许多国家，由线虫危害造成的香蕉产量损失达30%～60%[3-4]。目前，由于许多种植户对该线虫病原缺乏了解，盲目利用化学药剂和抗病品种防治根结线虫病原，不仅效果不理想，而且易造成土壤污染。因此，首先对根结线虫进行准确的鉴定成为防治该病的前提条件，本研究主要对海南省不同地区香蕉根结线虫进行初步鉴定，以期为该病害的有效防治提供理论依据。
1材料与方法
1.1采样地点
土壤采集于海南省儋州（木棠镇）、临高（红华农场）、澄迈（黄竹、福山、老城、金江、红光农场）及乐东县（万钟基地）4个香蕉种植产区，主要位于海南省的北部和南部地区。
1.2植株及土壤样品的采集
在上述不同试验区分别选取种植年限为1、2、3、4年的香蕉园，共采集32份土样和87份根样。取样时每块地按5点采样法随机选定5 点，每点5株，分别挖取具有根结的植株根系，土样取几个取样点表土下5～20 cm处植株根围的土壤，充分混匀后取出约500 g土，放入大塑料袋中，再放入标签注明采集时间、地点和采集人，封口后带回实验室及时分离。
1.3症状观察
对采集的根样及时进行症状观察。根据根结分级标准（表1）计算根结指数[5]：
根结指数=∑各级病级数×样本数总样本数×最高级数×100%。
表1香蕉根结线虫病评价分级标准
病级根结情况0级根系健康完整，无侵染1级严格检查才能发现极少数的小根结2级根结像1级大小，但数量稍多，较易见3级大量小结瘿，有时长在一起，根功能受损不严重4级大量小根结，有一些大根结，大多数根仍具功能5级25%根系严重根结和丧失功能6级50%根系严重根结和丧失功能7级75%根系严重根结和丧失能力8级无健康根，植株营养中断9级根系全部根结和腐烂，植株垂死
1.4根结线虫的分离
将根样用筛蔗糖离心法分离[6]，将有明显根结的植株用自来水冲洗干净，用1%过氧化氢表面消毒2 min，再用无菌水冲洗2次，将根系剪成1～2 cm长度的根段并加入适量的无菌水，用豆浆机打碎5 s后，倒入双层湿筛（160和400目）中并用无菌水冲洗3～5次，收集下层筛的2龄幼虫，并用38%蔗糖溶液离心后获得大量根结线虫，在解剖镜下用移液器吸取一定数量的线虫备用。土样利用贝尔曼漏斗法收集大量2龄幼虫[7]。
1.5线虫计数
将从根系及土壤样品中分离得到的根结线虫制成悬浮液，并置于底部画有刻度线的计数皿（直径为6 cm）中，在光学解剖镜下观察计数。
1.6杀死、固定及鉴定
收集所分离的2龄幼虫，65 ℃恒温热杀死后用等量4%甲醛溶液固定液进行固定，最后制成临时玻片，在高级显微镜下观察线虫形态特征，参考相关资料鉴定线虫种类[8-11]。
1.7数据分析
数据处理和统计分析采用Excel 2003软件完成。
2结果与分析
2.1香蕉根结症状
海南省儋州、临高、澄迈、乐东地区不同种植年限香蕉园共采集到87份根样进行病症观察，香蕉根结指数见表2，可以看出，随着年限的增加，不同地区香蕉根结指数逐渐增加，其中临高和澄迈地区香蕉根结指数较高，说明根结线虫危害较严重，而乐东地区香蕉根结线虫危害比较轻。
2.2线虫发生种类及种群数量
从海南省儋州、临高、澄迈、乐东地区采集的32份土样和87份根样中共分离得到7个属的寄生线虫，经鉴定分别为根结线虫属（Meloidogyne spp.）、肾形线虫属（Rotylenchulus spp.）、短体线虫属（Pratylenchus spp.）、茎线虫属（Ditylenchus spp.）、螺旋线虫属（Helicotylenchus spp.）、矮化线虫属（Tylenchorhynchus spp.）、真滑刃线虫属（Aphelenchus spp.）。从表3可以看出，根结线虫属、肾形线虫属分布较广，在所有调查的县（市）中均有分布，检出率分别为87.5%、93.8%；而螺旋线虫属、矮化线虫属、真滑刃线虫属的检出率比较低，分别为12.5%、93%、21.8%。 从表4种群数量来看，随着年限的增加，线虫数量也不断增加，其中根结线虫属、肾形线虫属最高，第1年分别占总虫数的42.8%、39.6%，第2年分别占总虫数的33.8%、430%，第3年分别占总虫数的45.9%、36.7%，第4年分别占总虫数的44.8、43.1%；从表3、表4中还可以看出，有的线虫分布较广，但是种群数量较低，如螺旋线虫属分布较广，占总样本数的56.25%，但种群数量比较低，第1年至第4年分别占总虫数的1.6%、2.1%、2.3%、0.9%。
3结论与讨论
由本研究对海南省儋州、临高、澄迈、乐东地区不同年限香蕉基地线虫的调查和鉴定结果可知，危害香蕉的主要线虫为根结线虫属、肾形线虫属、短体线虫属、茎线虫属、螺旋线虫属、矮化线虫属、真滑刃线虫属，其中根结线虫属、肾形线虫属为优势种群，分布较广泛。鄢小宁等在广东、广西2省香蕉上调查到的主要线虫种类为根结线虫属、肾状线虫属、螺旋线虫属、滑刃线虫属、丝尾垫刃线虫属等，其中根结线虫属比肾形线虫属的检出率高[4]；黎少梅在广东、海南2省调查到的香蕉线虫主要种类为肾状线虫属、根结线虫属、螺旋线虫属和根腐线虫属（Pratylenchus spp.），其中肾形线虫属的检出率比根结线虫属高[11]，与本试验研究结果一致，但是本试验未鉴定出根腐线虫属，增加了短体线虫属、茎线虫属、矮化线虫属、真滑刃线虫属，说明调查结果的差异可能与调查时间、寄主数量及采集地有关，而且近年来寄生线虫种类可能也发生了变化，线虫种类也在不断增加；本调查中没有发现有穿孔线虫属。
据有关文献报道，根结线虫属、肾形线虫属、螺旋线虫属对香蕉的危害较严重[13-15]。螺旋线虫属容易引起香蕉根部细胞坏死、衰萎和机能的变异，最终能导致整株香蕉衰退；根结线虫属主要侵染香蕉的根部，形成根结后影响香蕉根系吸收，容易造成产量减少；肾形线虫属主要侵染香蕉，进而引起侵染点附近内皮层细胞壁加厚，容易断裂；矮化线虫和短体线虫属目前危害较轻，但仍需要注意防治。
目前，香蕉根结线虫病已经成为海南省香蕉种植地区的重要病害，由于近年来香蕉长期种植，复种率高，病原线虫不断增加，导致根结线虫病发生越来越严重，造成香蕉产量降低。为了有效和可持续控制香蕉根结线虫病，一方面要开展对香蕉根结线虫种类的鉴定工作，明确其种群并制定相应的防治措施；另一方面要加强微生物防治技术研究。
参考文献：
[1]黄秉智. 香蕉优质高产栽培[M]. 北京：金盾出版社，2008：1-8.
[2]李丰年，曾惜冰，黄秉智. 香蕉栽培技术[M]. 广州：广东科技出版社，1999：1-10.
[3]李一农，李芳荣，罗海燕，等. 外来入侵生物香蕉穿孔线虫管理对策[J]. 植物保护，2006，32（6）：119-121.
[4]鄢小宁，郑服丛，林茂松. 两广地区香蕉根际寄生线虫的调查与鉴定[J]. 热带农业科学，2005，25（6）：4-8.
[5]张绍升. 植物线虫病害诊断与治理[M]. 福州：福建科学技术出版社，1999：105.
[6]陈立杰，王旭，段玉玺，等.蔗糖离心法分离土壤线虫的最佳条件筛选[J].沈阳农业大学学报，2007，38（6）：849-851.
[7]方中达.植病研究方法[M]. 3版.北京：中国农业出版社，1998：306-311.
[8]Eisenback J D，Hirschmann H，Sasser J N，et al.四种最常见根结线虫分类指南[M]. 杨宝君，译. 昆明：云南人民出版社，1986.
[9]杨宝君. 十五种根结线虫病害的病原鉴定[J]. 植物病理学报，1984，4（2）：107-111.
[10]思彬彬，张学娟，张靠稳. 不同寄主上南方根结线虫的 ISSR-PCR 鉴别[J]. 江苏农业科学，2014，42（3）：35-36.
[11]刘维志. 植物线虫志[M]. 北京：中国农业出版社，2004：39-655.
[12]黎少梅. 广东海南两省与香蕉有关的植物寄生线虫[J]. 热带作物科技，1991（1）：43-45.
[13]黎少梅，许克林，黎春生，等. 广东香蕉肾状线虫病的分布为害及病原鉴定[J]. 华南农业大学学报，1987，8（4）：9-14.
[14]李夷波，王寿华，李春敏，等. 云南河口香蕉黄化束顶病研究Ⅰ.症状与发病规律[J]. 植物病理学报，1995，25（2）：143-147.
[15]李迅东，翟留香，李芹.云南香蕉根际线虫种群动态的研究[J].华南农业大学学报，1998，19（4）：32-35.
谢美华 李霖 李雪玲，等. 芒萁叶斑病病原菌分离鉴定和生物学特性[J]. 江苏农业科学，2015，43（2）：130-133.
关键词：香蕉；根结线虫；海南地区；优势种群；根结线虫属；肾形线虫属
中图分类号： S436.68 1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）02-0128-02
收稿日期：2014-04-14
基金项目：海南大学青年基金（编号：qnjj1201）；海南省自然科学基金（编号：312060）。
作者简介：赵艳（1981—），女，山西太谷人，博士，讲师，主要从事微生物相关研究。E-mail：yanbo315@126.com。
通信作者：张晓波，博士，副教授，研究方向为草坪管理相关研究。E-mail：23065041@qq.com。根结线虫（Meloidogyne spp.）是一类在植物上危害极为严重的寄生线虫，是植物线虫中种类最多、分布最广和危害最严重的类群之一。海南省作为我国香蕉主产区，香蕉栽培面积不断扩大，取得了显著的经济效益[1-2]。近年来，由于气候条件及栽培管理等的影响，海南省香蕉根结线虫病的发生越来越严重，在许多国家，由线虫危害造成的香蕉产量损失达30%～60%[3-4]。目前，由于许多种植户对该线虫病原缺乏了解，盲目利用化学药剂和抗病品种防治根结线虫病原，不仅效果不理想，而且易造成土壤污染。因此，首先对根结线虫进行准确的鉴定成为防治该病的前提条件，本研究主要对海南省不同地区香蕉根结线虫进行初步鉴定，以期为该病害的有效防治提供理论依据。
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1.1采样地点
土壤采集于海南省儋州（木棠镇）、临高（红华农场）、澄迈（黄竹、福山、老城、金江、红光农场）及乐东县（万钟基地）4个香蕉种植产区，主要位于海南省的北部和南部地区。
1.2植株及土壤样品的采集
在上述不同试验区分别选取种植年限为1、2、3、4年的香蕉园，共采集32份土样和87份根样。取样时每块地按5点采样法随机选定5 点，每点5株，分别挖取具有根结的植株根系，土样取几个取样点表土下5～20 cm处植株根围的土壤，充分混匀后取出约500 g土，放入大塑料袋中，再放入标签注明采集时间、地点和采集人，封口后带回实验室及时分离。
1.3症状观察
对采集的根样及时进行症状观察。根据根结分级标准（表1）计算根结指数[5]：
根结指数=∑各级病级数×样本数总样本数×最高级数×100%。
表1香蕉根结线虫病评价分级标准
病级根结情况0级根系健康完整，无侵染1级严格检查才能发现极少数的小根结2级根结像1级大小，但数量稍多，较易见3级大量小结瘿，有时长在一起，根功能受损不严重4级大量小根结，有一些大根结，大多数根仍具功能5级25%根系严重根结和丧失功能6级50%根系严重根结和丧失功能7级75%根系严重根结和丧失能力8级无健康根，植株营养中断9级根系全部根结和腐烂，植株垂死
1.4根结线虫的分离
将根样用筛蔗糖离心法分离[6]，将有明显根结的植株用自来水冲洗干净，用1%过氧化氢表面消毒2 min，再用无菌水冲洗2次，将根系剪成1～2 cm长度的根段并加入适量的无菌水，用豆浆机打碎5 s后，倒入双层湿筛（160和400目）中并用无菌水冲洗3～5次，收集下层筛的2龄幼虫，并用38%蔗糖溶液离心后获得大量根结线虫，在解剖镜下用移液器吸取一定数量的线虫备用。土样利用贝尔曼漏斗法收集大量2龄幼虫[7]。
1.5线虫计数
将从根系及土壤样品中分离得到的根结线虫制成悬浮液，并置于底部画有刻度线的计数皿（直径为6 cm）中，在光学解剖镜下观察计数。
1.6杀死、固定及鉴定
收集所分离的2龄幼虫，65 ℃恒温热杀死后用等量4%甲醛溶液固定液进行固定，最后制成临时玻片，在高级显微镜下观察线虫形态特征，参考相关资料鉴定线虫种类[8-11]。
1.7数据分析
数据处理和统计分析采用Excel 2003软件完成。
2结果与分析
2.1香蕉根结症状
海南省儋州、临高、澄迈、乐东地区不同种植年限香蕉园共采集到87份根样进行病症观察，香蕉根结指数见表2，可以看出，随着年限的增加，不同地区香蕉根结指数逐渐增加，其中临高和澄迈地区香蕉根结指数较高，说明根结线虫危害较严重，而乐东地区香蕉根结线虫危害比较轻。
2.2线虫发生种类及种群数量
从海南省儋州、临高、澄迈、乐东地区采集的32份土样和87份根样中共分离得到7个属的寄生线虫，经鉴定分别为根结线虫属（Meloidogyne spp.）、肾形线虫属（Rotylenchulus spp.）、短体线虫属（Pratylenchus spp.）、茎线虫属（Ditylenchus spp.）、螺旋线虫属（Helicotylenchus spp.）、矮化线虫属（Tylenchorhynchus spp.）、真滑刃线虫属（Aphelenchus spp.）。从表3可以看出，根结线虫属、肾形线虫属分布较广，在所有调查的县（市）中均有分布，检出率分别为87.5%、93.8%；而螺旋线虫属、矮化线虫属、真滑刃线虫属的检出率比较低，分别为12.5%、93%、21.8%。 从表4种群数量来看，随着年限的增加，线虫数量也不断增加，其中根结线虫属、肾形线虫属最高，第1年分别占总虫数的42.8%、39.6%，第2年分别占总虫数的33.8%、430%，第3年分别占总虫数的45.9%、36.7%，第4年分别占总虫数的44.8、43.1%；从表3、表4中还可以看出，有的线虫分布较广，但是种群数量较低，如螺旋线虫属分布较广，占总样本数的56.25%，但种群数量比较低，第1年至第4年分别占总虫数的1.6%、2.1%、2.3%、0.9%。
3结论与讨论
由本研究对海南省儋州、临高、澄迈、乐东地区不同年限香蕉基地线虫的调查和鉴定结果可知，危害香蕉的主要线虫为根结线虫属、肾形线虫属、短体线虫属、茎线虫属、螺旋线虫属、矮化线虫属、真滑刃线虫属，其中根结线虫属、肾形线虫属为优势种群，分布较广泛。鄢小宁等在广东、广西2省香蕉上调查到的主要线虫种类为根结线虫属、肾状线虫属、螺旋线虫属、滑刃线虫属、丝尾垫刃线虫属等，其中根结线虫属比肾形线虫属的检出率高[4]；黎少梅在广东、海南2省调查到的香蕉线虫主要种类为肾状线虫属、根结线虫属、螺旋线虫属和根腐线虫属（Pratylenchus spp.），其中肾形线虫属的检出率比根结线虫属高[11]，与本试验研究结果一致，但是本试验未鉴定出根腐线虫属，增加了短体线虫属、茎线虫属、矮化线虫属、真滑刃线虫属，说明调查结果的差异可能与调查时间、寄主数量及采集地有关，而且近年来寄生线虫种类可能也发生了变化，线虫种类也在不断增加；本调查中没有发现有穿孔线虫属。
据有关文献报道，根结线虫属、肾形线虫属、螺旋线虫属对香蕉的危害较严重[13-15]。螺旋线虫属容易引起香蕉根部细胞坏死、衰萎和机能的变异，最终能导致整株香蕉衰退；根结线虫属主要侵染香蕉的根部，形成根结后影响香蕉根系吸收，容易造成产量减少；肾形线虫属主要侵染香蕉，进而引起侵染点附近内皮层细胞壁加厚，容易断裂；矮化线虫和短体线虫属目前危害较轻，但仍需要注意防治。
目前，香蕉根结线虫病已经成为海南省香蕉种植地区的重要病害，由于近年来香蕉长期种植，复种率高，病原线虫不断增加，导致根结线虫病发生越来越严重，造成香蕉产量降低。为了有效和可持续控制香蕉根结线虫病，一方面要开展对香蕉根结线虫种类的鉴定工作，明确其种群并制定相应的防治措施；另一方面要加强微生物防治技术研究。
参考文献：
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