【摘 要】
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为了获得高产、抗原性好的16型蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV) VP2蛋白,试验将16型BTV(BTV-16)L2基因的VP2片段插入原核表达载体pET-32a中构建重组原核表达载体pET32a-VP2
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广州510642;深圳海关动植物检验检疫技术中心,深圳518045;深圳市龙岗区吉华街道食物环境监管中心,深圳518122
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为了获得高产、抗原性好的16型蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV) VP2蛋白,试验将16型BTV(BTV-16)L2基因的VP2片段插入原核表达载体pET-32a中构建重组原核表达载体pET32a-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,采用自诱导表达培养基Overnight ExpressTM Instant LB Media在不同温度条件下进行原核表达,优化最佳诱导条件,利用蛋白纯化试剂盒纯化重组蛋白VP2,并用Western-blot技术和动物试验进行抗原性鉴定.结果 表明:试验成功构建出重组原核表达载体pET32a-VP2;重组蛋白VP2在37℃、过夜诱导表达条件下的表达量最高;纯化后的重组蛋白VP2的浓度为2.722 mg/mL,能与BTV阳性血清发生特异性结合,第二次接种小鼠后第14天的血清效价为1∶128.说明试验所表达的重组蛋白VP2的产量高、抗原性好,可作为特异性抗原用于研究区分感染和免疫动物特性的BTV疫苗以及建立新的诊断方法.
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