【摘 要】
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利用毕赤酵母表达系统表达芥菜几丁质酶基因BjCHI1及其两个衍生基因BjCHI2和BjCHI3,获得相应的蛋白质.经FPLC纯化后,测定了3种蛋白质的几丁质酶活性,发现它们均能降解CM-chit
【机 构】
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中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081;中国农业科学院作物育种栽培研究所、农业部作物遗传育种重点实验室,北京,100081;香港大学植物系,中国香
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利用毕赤酵母表达系统表达芥菜几丁质酶基因BjCHI1及其两个衍生基因BjCHI2和BjCHI3,获得相应的蛋白质.经FPLC纯化后,测定了3种蛋白质的几丁质酶活性,发现它们均能降解CM-chitin-RBV和胶状几丁质.以CM-chitin-RBV为底物时的Km值分别为0.799mg/mL、0.544mg/mL和0.793mg/mL,差别甚微.而以胶状几丁质为底物时的Km值分别为0.281mg/mL、0.388mg/mL和1.643mg/mL,表现一定的差别,说明几丁质结合域影响了酶对不溶性底物的亲和力.3种蛋白中,只有BjCHI1在33μg/mL以上浓度具有凝集素活性,而BjCHI2和BjCHI3的浓度即使高达800μg/mL也无凝集素活性,表明2个几丁质结合域是BjCHI1具有凝集素活性的必需条件,这是植物中发现的第一个兼有几丁质酶和凝集素活性的蛋白质.
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