【摘 要】
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目的 建立定量检测肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）疫苗抗原含量的检测方法，并进行验证。方法 用EV71 VLP抗原免疫日本大耳白兔，制备多克隆抗体，并进行Protein A亲和层析纯化。以纯化的抗EV71 VLP多克隆抗体为包被抗体，筛选最佳包被浓度及酶标抗体稀释倍数，建立定量检测EV71VLP抗原含量的双抗体夹心
【基金项目】
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吉林省产业自主创新能力项目专项-蛋白质工程创新技术平台（2019C006）；
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目的 建立定量检测肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）疫苗抗原含量的检测方法，并进行验证。方法 用EV71 VLP抗原免疫日本大耳白兔，制备多克隆抗体，并进行Protein A亲和层析纯化。以纯化的抗EV71 VLP多克隆抗体为包被抗体，筛选最佳包被浓度及酶标抗体稀释倍数，建立定量检测EV71VLP抗原含量的双抗体夹心ELISA法，并对该方法进行准确度、精密度验证，确定方法的线性范围和定量限。结果抗EV71多克隆抗体包被浓度5μg/mL，酶标抗体稀释度1∶10 000条件下，建立了检测EV71 VLP抗原含量的双抗体夹心ELISA法。抗原标准品浓度在0.5～8 U/mL范围内，其对数值与对应的A450值对数值呈良好的线性关系，R2=0.992 7，定量限为2 ng/mL；准确度验证回收率为81%～106%；精密度验证相对标准偏差（RSD）为4.96%～12.04%。结论 建立了用于EV71 VLP抗原定量检测的双抗体夹心ELISA法，有望用于EV71 VLP疫苗抗原含量的初步检测。
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