【摘 要】
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目的 原核表达弓形虫微线体蛋白6 (TgMIC6)结构功能域,并制备其多克隆抗体. 方法 运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫MIC6 (TgMIC6)功能区的编码序列进行密码子优化,
【机 构】
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安徽医科大学病原生物学教研室,病原生物学安徽省重点实验室,人兽共患病安徽省高校重点实验室,安徽合肥230032;安徽医科大学合肥第三临床学院合肥市第三人民医院检验科
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目的 原核表达弓形虫微线体蛋白6 (TgMIC6)结构功能域,并制备其多克隆抗体. 方法 运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫MIC6 (TgMIC6)功能区的编码序列进行密码子优化,合成优化后的编码基因,并将其克隆入pET30a原核表达载体,构建pET30a-MIC6重组质粒;重组质粒转化入大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,经His亲和层析纯化后以His单克隆抗体为一抗进行Western blot鉴定.用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,抗体纯化后分别运用ELISA和Western blot对其效价和特异性进行分析. 结果 成功构建了pET30a-MIC6原核表达载体.表达的TgMIC6融合蛋白相对分子质量为45×103,与预期相符,纯化后浓度为0.5mg/ml.以纯化的融合蛋白为抗原制备兔源性抗血清,ELISA测定其效价为1∶25 600,抗体浓度3.2 mg/ml,纯度＞90％,Western blot显示该抗体能识别TgMIC6重组蛋白和不同虫株内的天然MIC6蛋白. 结论 优化后的TgMIC6功能区在原核表达系统内高效表达,制备的TgMIC6多克隆抗体效价高,特异性强,可识别重组菌和不同虫株表达的TgMIC6.
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