【摘 要】
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目的研究鉴定mfg12凝血酶原酶/纤维介素基因转录激活所必需的调控元件或转录因子.方法应用免疫印迹法检测Ba1b/c小鼠的巨噬细胞内是否表达肝细胞核因子4(HNF4),共聚焦显微镜
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目的研究鉴定mfg12凝血酶原酶/纤维介素基因转录激活所必需的调控元件或转录因子.方法应用免疫印迹法检测Ba1b/c小鼠的巨噬细胞内是否表达肝细胞核因子4(HNF4),共聚焦显微镜免疫荧光技术检测鼠肝炎病毒(MHV)的核心(N)蛋白质是否进入被感染细胞核.应用DNA电泳迁移差异检测、竞争实验和定点诱变技术鉴定mfgl2基因转录激活所必需的调控元件或转录因子.结果免疫印迹法表明巨噬细胞可持续表达HNF4.共聚焦显微镜免疫荧光技术证实MHV的N蛋白质可进入被感染细胞核内.凝胶移位分析和竞争实验显示HNF4 和巨细胞病毒早期蛋白基因1.2(IE1.2)均可与特异寡核苷酸竞争结合mfgl2启动子上特定位点而不与非特异寡核苷酸发生竞争.HNF4特异性多克隆抗体竞争试验可见超迁移带.定点突变mfgl2启动子上HNF4所结合的顺式调控元件可降低野生型mfgl2启动子的转录活动达75%,联合突变IE1.2结合位点未见协同效应.单纯突变IE1.2结合位点后,野生型mfgl2启动子的转录活动仍可保留75%～80%. 结论 HNF4具有与mfgl2/fibroleukin启动子结合的特性,为MHV-3 N蛋白质诱导mfgl2/fibroleukin基因表达的必备转录因子.
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