【摘 要】
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目的 定量比较分析不同黏膜上皮细胞中人巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)的转录水平.方法 体外转录制备MIP-3α RNA标准品,人工合成MIP-3α mRNA序列特异的引物及TaqMan探针.
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目的 定量比较分析不同黏膜上皮细胞中人巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)的转录水平.方法 体外转录制备MIP-3α RNA标准品,人工合成MIP-3α mRNA序列特异的引物及TaqMan探针.利用TaqMan EZ RT-PCR试剂盒的反应体系和ABI实时荧光定量PCR仪进行实时荧光定量RT-PCR.通过对RT-PCR产物测序、使用标准品和质控品进行多次独立测试等评估实时荧光定量RT-PCR方法的特异性、灵敏度和可重复性.随后对不同黏膜上皮细胞系Caco-2、T-84、HeLa和淋巴细胞系PM1中MIP-3α mRNA水平进行了定量检测.结果 建立了可用于MIP-3α mRNA水平定量检测的实时荧光定量RT-PCR方法,该方法特异性好(扩增片段测序结果与参考序列完全一致)、灵敏度高(25 μl反应体系中有5个拷贝就可以检出)、检测样品浓度范围广(103～1010拷贝/ml).对Caco-2、T-84、HeLa和PM1细胞中MIP-3α mRNA水平的定量分析表明,肠黏膜上皮细胞Caco-2和T-84的MIP-3α mRNA水平比HeLa和PM1细胞高.结论 黏膜上皮细胞能表达丰富的MIP-3α,不同黏膜上皮细胞MIP-3α的表达水平可能不同.
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