论文部分内容阅读
【摘 要】本文采用高校液相测定了不同品种黄连中黄连碱和表小檗碱的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），以乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（30：35：35：0.01）为流动相，检测波长为345nm；表小檗碱在10～40μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；黄连碱在100～400μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。表小檗碱和黄连碱的平均回收率分别为99.5%、99.6%，RSD为0.53%（n=6）、0.55%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于黄连中表小檗碱和黄连碱的含量测定。
【关键词】黄连；表小檗碱；黄连碱
黄连，属毛莨科黄连属，是一种常用中药，最早载于《神农本草经》。《神农本草经》记载：“味苦，寒。主治热气，目痛，眦伤，泣出，明目，肠澼，腹痛，下痢，妇人阴中肿痛。久服令人不忘。”黄连具有抗菌、抗真、抗病毒、抗阿米巴、抗炎、抗腹泻、对心血管、解热、降血糖、降血脂、抗氧化、抗溃疡等作用。黄连主要分布于四川、贵州、湖南、湖北、陕西南部等地。黄连碱为黄连主要成分之一。黄连碱具有抗微生物活性；对胃粘膜有保护作用；抗癌作用；抗肾炎作用[1]。本文采用高校液相测定了不同品种黄连中黄连碱和表小檗碱的含量。
1.仪器与试药
海能LC7000四元低压梯度系统（济南海能仪器股份有限公司）；TBL10-250C双频加热型超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司）；上海元析UV-9000型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）；HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；赛多利斯BSA124S电子天平（广州市深华生物技术有限公司）；SK250HP功率可调台式超声波清洗器（上海垒固仪器有限公司）；Histoon Lab I-05实验室超纯水器（科尔顿（中国）有限公司）。表小檗碱和黄连碱对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、甲醇（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、醋酸钠（上海楚柏实验室设备有限公司）、磷酸二氢钠（上海亨代劳生物有限公司）、溴化四丁基铵（南宁市恒源化工有限公司）、三乙胺（上海楚柏实验室设备有限公司）、四氢呋喃（上海亨代劳生物有限公司）、磷酸（上海亨代劳生物有限公司）。
2.含量测定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果[2-6] ，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（30：35：35：0.01）；检测波长为345nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按黄连碱峰计算应不得低于2000。
2.2供试品溶液的制备
取黄连适量，精密量取，置50mL量瓶中，加3%盐酸甲醇溶液适量，超声处理五十分钟，放置至室温，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.3对照品溶液的制备
分别精密称取黄连碱和表小檗碱对照品20mg、2mg，置100mL容量瓶中，用70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4标准曲线的制备
制备浓度为10μg·mL-1、15μg·mL-1、20μg·mL-1、25μg·mL-1、30μg·mL-1、35μg·mL-1、40μg·mL-1的表小檗碱对照品溶液，制备浓度为100μg·mL-1、150μg·mL-1、200μg·mL-1、250μg·mL-1、300μg·mL-1、350μg·mL-1、400μg·mL-1的黄连碱对照品溶液。分别按表小檗碱、黄连碱的测定参数继续测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，表小檗碱在10～40μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；黄连碱在100～400μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取表小檗碱和黄连碱对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.69%和0.79%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6重现性试验
分别称取同批黄连样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.65%，0.63%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，8h进样测定，供试品表小檗碱和黄连碱峰面积的RSD分别为0.77%和0.81%。结果表明表小檗碱和黄连碱至少在8h内稳定。
2.8回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的表小檗碱和黄连碱对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.5%和99.6%，RSD分别为0.53%和0.55%。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定不同产地黄连中表小檗碱和黄连碱的含量，结果贵州表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点三，百分之一点九；四川石柱表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点无，百分之一点八；四川巫溪表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点一，百分之二点三；湖北房县表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之零点九，百分之二点二；四川峨嵋表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点六，百分之一点一；云南德钦表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点九，百分之零点九；云南碧江表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之二点一，百分之一点一。
3.讨论
分别考察甲醇-四氢呋喃-0.075mol/L醋酸钠缓冲液（pH4.5）（30：20：50），乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（40：30：30：0.01），甲醇-四氢呋喃-0.075mol/L醋酸钠缓冲液（pH5.0）（30：20：50），甲醇-乙腈-水（20：20：60），乙腈-1.0%醋酸溶液（32∶68），乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（30：35：35：0.01）为流动相，结果以乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（30：35：35：0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（30：35：35：0.01）为流动相。 [科]
【参考文献】
[1]李宗友.胡黄连中环烯醚萜甙胡黄连素、胡黄连苦甙1和胡黄连甙的抗炎活性[J].国外医学（中医中药分册），1994（05）.
[2]王菁，张朝晖，戴永健，吴如金.HPLC测定胡黄连中胡黄连甙-Ⅱ的含量[J].中国药科大学学报，2000（05）.
[3]李建光，韩松林，赵东升，张海波，耿晶，李新霞.一测多评法测定新疆两种洋甘菊中5种化学成分含量[J].医药导报，2014（11）.
[4]田原，于艳，陈雪，闫冬，徐晶.大孔吸附树脂纯化黄连中4种生物碱的含量测定[J].中华中医药学刊，2014（05）.
[5]张朝晖，戴永健，王瑾，王菁，吴如金.RP-HPLC法测定胡黄连药材中胡黄连甙-Ⅱ的含量[J].南京军医学院学报，2000（03）.
[6]侯建忠，喻利坚，杨铖.HPLC测定舒通安泰胶囊中小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀含量[J].中国中医药信息杂志，2014（07）.
【关键词】黄连；表小檗碱；黄连碱
黄连，属毛莨科黄连属，是一种常用中药，最早载于《神农本草经》。《神农本草经》记载：“味苦，寒。主治热气，目痛，眦伤，泣出，明目，肠澼，腹痛，下痢，妇人阴中肿痛。久服令人不忘。”黄连具有抗菌、抗真、抗病毒、抗阿米巴、抗炎、抗腹泻、对心血管、解热、降血糖、降血脂、抗氧化、抗溃疡等作用。黄连主要分布于四川、贵州、湖南、湖北、陕西南部等地。黄连碱为黄连主要成分之一。黄连碱具有抗微生物活性；对胃粘膜有保护作用；抗癌作用；抗肾炎作用[1]。本文采用高校液相测定了不同品种黄连中黄连碱和表小檗碱的含量。
1.仪器与试药
海能LC7000四元低压梯度系统（济南海能仪器股份有限公司）；TBL10-250C双频加热型超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司）；上海元析UV-9000型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）；HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；赛多利斯BSA124S电子天平（广州市深华生物技术有限公司）；SK250HP功率可调台式超声波清洗器（上海垒固仪器有限公司）；Histoon Lab I-05实验室超纯水器（科尔顿（中国）有限公司）。表小檗碱和黄连碱对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、甲醇（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、醋酸钠（上海楚柏实验室设备有限公司）、磷酸二氢钠（上海亨代劳生物有限公司）、溴化四丁基铵（南宁市恒源化工有限公司）、三乙胺（上海楚柏实验室设备有限公司）、四氢呋喃（上海亨代劳生物有限公司）、磷酸（上海亨代劳生物有限公司）。
2.含量测定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果[2-6] ，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（30：35：35：0.01）；检测波长为345nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按黄连碱峰计算应不得低于2000。
2.2供试品溶液的制备
取黄连适量，精密量取，置50mL量瓶中，加3%盐酸甲醇溶液适量，超声处理五十分钟，放置至室温，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.3对照品溶液的制备
分别精密称取黄连碱和表小檗碱对照品20mg、2mg，置100mL容量瓶中，用70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4标准曲线的制备
制备浓度为10μg·mL-1、15μg·mL-1、20μg·mL-1、25μg·mL-1、30μg·mL-1、35μg·mL-1、40μg·mL-1的表小檗碱对照品溶液，制备浓度为100μg·mL-1、150μg·mL-1、200μg·mL-1、250μg·mL-1、300μg·mL-1、350μg·mL-1、400μg·mL-1的黄连碱对照品溶液。分别按表小檗碱、黄连碱的测定参数继续测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，表小檗碱在10～40μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；黄连碱在100～400μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取表小檗碱和黄连碱对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.69%和0.79%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6重现性试验
分别称取同批黄连样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.65%，0.63%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，8h进样测定，供试品表小檗碱和黄连碱峰面积的RSD分别为0.77%和0.81%。结果表明表小檗碱和黄连碱至少在8h内稳定。
2.8回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的表小檗碱和黄连碱对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.5%和99.6%，RSD分别为0.53%和0.55%。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定不同产地黄连中表小檗碱和黄连碱的含量，结果贵州表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点三，百分之一点九；四川石柱表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点无，百分之一点八；四川巫溪表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点一，百分之二点三；湖北房县表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之零点九，百分之二点二；四川峨嵋表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点六，百分之一点一；云南德钦表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之一点九，百分之零点九；云南碧江表小檗碱和黄连碱含量分别为百分之二点一，百分之一点一。
3.讨论
分别考察甲醇-四氢呋喃-0.075mol/L醋酸钠缓冲液（pH4.5）（30：20：50），乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（40：30：30：0.01），甲醇-四氢呋喃-0.075mol/L醋酸钠缓冲液（pH5.0）（30：20：50），甲醇-乙腈-水（20：20：60），乙腈-1.0%醋酸溶液（32∶68），乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（30：35：35：0.01）为流动相，结果以乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（30：35：35：0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-0.05%磷酸二氢钠-0.05%十二烷基硫酸钠-磷酸（30：35：35：0.01）为流动相。 [科]
【参考文献】
[1]李宗友.胡黄连中环烯醚萜甙胡黄连素、胡黄连苦甙1和胡黄连甙的抗炎活性[J].国外医学（中医中药分册），1994（05）.
[2]王菁，张朝晖，戴永健，吴如金.HPLC测定胡黄连中胡黄连甙-Ⅱ的含量[J].中国药科大学学报，2000（05）.
[3]李建光，韩松林，赵东升，张海波，耿晶，李新霞.一测多评法测定新疆两种洋甘菊中5种化学成分含量[J].医药导报，2014（11）.
[4]田原，于艳，陈雪，闫冬，徐晶.大孔吸附树脂纯化黄连中4种生物碱的含量测定[J].中华中医药学刊，2014（05）.
[5]张朝晖，戴永健，王瑾，王菁，吴如金.RP-HPLC法测定胡黄连药材中胡黄连甙-Ⅱ的含量[J].南京军医学院学报，2000（03）.
[6]侯建忠，喻利坚，杨铖.HPLC测定舒通安泰胶囊中小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀含量[J].中国中医药信息杂志，2014（07）.