【摘 要】
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目的 探讨脱细胞胆管细胞外基质(ECM)的制备方法及其替代胆总管缺损的可行性.方法 采用4因素3水平9次实验的正交设计[L9(34)],切取活体犬的肝外胆管39段,每段长1 cm,其中27段
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目的 探讨脱细胞胆管细胞外基质(ECM)的制备方法及其替代胆总管缺损的可行性.方法 采用4因素3水平9次实验的正交设计[L9(34)],切取活体犬的肝外胆管39段,每段长1 cm,其中27段按正交设计随机分为9组行脱细胞处理,试验重复3次.采用苏木素-伊红(HE)染色及计算机图像分析对ECM进行残余细胞成分计数,进行极差分析及方差分析,获得制备ECM的最佳方案.另12段胆管按最佳方案制备成ECM并用于同种异体胆总管缺损修复实验.分别于术后2、4、12及24周取材观察缺损修复处组织再生情况.结果 脱细胞后第7、9组未发现残余细胞,ECM富含胶原,第9组胶原呈立体交叉交联.移植术后2周,ECM内膜面见少量单层上皮细胞,有血管长入其中,ECM中有少量成纤维和平滑肌细胞,吻合口处有较多炎性细胞浸润;4周ECM管腔被上皮细胞覆盖,排列整齐,ECM中有较多成纤维和少量平滑肌细胞,吻合口有少量炎性细胞浸润;12周吻合痕迹消失,ECM中有较多成纤维、平滑肌细胞和少量纤维细胞;24周ECM中有以平滑肌细胞和纤维细胞为主,少量成纤维细胞,结构近似正常.结论 制备ECM中3个关键条件的最佳水平为A3B3C3,即在胆管脱细胞处理过程中采用0.4%胰蛋白酶、1.0%叠氮二苯基磷(DPPA)、40 U/ml DNA酶.所得ECM应用于犬同种异体胆总管端端吻合修补,效果满意.
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