【摘 要】
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目的 研究人肾癌ACHN细胞中胰岛素样生长因子2( IGF2)基因的印迹状态及甲基化诱导药物TCF1001对IGF2启动子hP4区域甲基化状态的影响,并进一步探讨靶向诱导IGF2启动子hP4甲基
【机 构】
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上海交通大学医学院附属新华医院泌尿外科 200092上海交通大学药学院 200240;
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目的 研究人肾癌ACHN细胞中胰岛素样生长因子2( IGF2)基因的印迹状态及甲基化诱导药物TCF1001对IGF2启动子hP4区域甲基化状态的影响,并进一步探讨靶向诱导IGF2启动子hP4甲基化对ACHN细胞IGF2印迹状态的影响.方法 采用聚合酶链反应-限制性内切酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法鉴定ACHN细胞IGF2基因组杂合状态,并对其印迹状态进行分析,判断IGF2基因是否处于基因印迹丢失(LOI)状态.实验组用甲基化诱导药物TCF1001,对照组用CT010,空白组用PBS处理ACHN细胞,提取基因组DNA后,采用亚硫酸氢盐测序法研究其对ACHN细胞IGF2启动子hP4区域甲基化水平的影响,同时采用PCR-RFLP法研究其对IGF2基因印迹状态的影响.结果 人肾癌ACHN细胞IGF2基因处于LOI.TCF1001可有效地靶向诱导IGF2启动子hP4区域发生部分甲基化. IGF2启动子hP4甲基化可逆转IGF2基因的LOI.结论 TCF1001可靶向诱导ACHN细胞IGF2基因启动子hP4甲基化, hP4甲基化可逆转人肾癌细胞IGF2基因的LOI,为肾癌的基因治疗提供理论依据.
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