【摘 要】
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目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb).方
【机 构】
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扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb).方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,用间接ELISA方法检测筛选.结果:阳性细胞株经3代克隆纯化后,获得3株能稳定分泌抗FPV ORF214蛋白mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2F10C9、3C3 B10、2G8G7.3株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与FPV ORF214蛋白反应,细胞上清ELISA效价均在1×102以上,mAb腹水效价达1×104以上.结论:该特异性mAb的研制成功为进一步研究ORF214的生物学特性奠定基础.
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