动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV RTase)的制备

来源 :中国兽医杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：zhangjie333666

【摘要】

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反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体

【作者】

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牛建蕊高志强蒲静张伟刘环刘文晓张鹤晓

【机构】

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北京森康生物技术开发有限公司,北京出入境检验检疫局

【出处】

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中国兽医杂志

【发表日期】

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2016年11期

【关键词】

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M-MLV RTase 表达纯化 RT-PCR

【基金项目】

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国家质检总局科技计划项目(2014IK232)

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反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱导后实现M-MLV RTase的可溶性表达。利用Ni^2＋柱亲和层析纯化载有6x His标记的重组MMLV RTase,对重组酶进行Western Blotting试验,鉴定为M-MLV RTase。通过对动物流感病毒RNA的普通RT-PCR和荧光

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