观察腺病毒介导Tum5重组基因对高糖刺激下恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)增生、迁移及管腔形成的影响。
方法构建空载体病毒rAd-绿色荧光蛋白(GFP)和携带Tum5基因的重组腺病毒表达载体(rAd-Tum5)。分别感染RF/6A细胞，流式细胞仪检测感染效率。细胞感染48 h后，采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Tum5重组基因体外表达。将RF/6A细胞分为正常对照组、高糖刺激对照组(HG组)，空载体对照组(HG＋rAd-GFP组)，Tum5基因组(HG＋rAd-Tum5组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、侵袭小室(Transwell)实验及基质胶(Matrigel)实验分析Tum5重组基因对高糖刺激下RF/6A细胞增生、迁移及管腔形成的影响。
结果流式细胞仪检测结果显示，rAd-GFP、rAd-Tum5感染细胞的效率分别为55.13%、50.31%。Western blot检测结果显示，HG＋rAd-Tum5组在相对分子质量14×103左右处可见Tum5蛋白表达条带；正常对照组、HG组、HG＋rAd-GFP组均未见Tum5蛋白表达条带。CCK-8、Transwell实验及Matrigel实验结果显示，正常组、HG组、HG＋rAd-GFP组、HG＋rAd-Tum5组4组间细胞增生数量、迁移数量及成形管腔数量比较，差异均有统计学意义(F＝44.484、772.666、137.696，P<0.05)。组间细胞增生数量、迁移数量及成形管腔数量两两比较结果显示，HG组较正常对照组增加，差异有统计学意义(P<0.05)；HG组与HG＋rAd-Tum5组之间无明显差异(P>0.05)；HG＋rAd-Tum5组较HG组、HG＋rAd-GFP组明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论腺病毒介导Tum5重组基因可抑制高糖刺激下RF/6A细胞的增生、迁移及管腔形成。