【摘 要】
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目的确定一套CD226单克隆抗体(McAb)识别CD226分子胞膜外区结构域的部位. 方法应用计算机软件分析CD226分子蛋白质序列疏水性,确定其亲水性区域.采用PCR方法扩增CD226分子基因序列,分别缺失相应亲水性区域,构建CD226截短体重组真核细胞表达载体pcDNA3-PTA1T1和pcDNA3-PTA1T2.测序正确后,转染COS7细胞,抗CD226分子多克隆抗体间接免疫荧光染色,流式细
【机 构】
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710032,西安,第四军医大学免疫学教研室,
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目的确定一套CD226单克隆抗体(McAb)识别CD226分子胞膜外区结构域的部位. 方法应用计算机软件分析CD226分子蛋白质序列疏水性,确定其亲水性区域.采用PCR方法扩增CD226分子基因序列,分别缺失相应亲水性区域,构建CD226截短体重组真核细胞表达载体pcDNA3-PTA1T1和pcDNA3-PTA1T2.测序正确后,转染COS7细胞,抗CD226分子多克隆抗体间接免疫荧光染色,流式细胞术检测CD226分子截短体的表达.表达成功后,采用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析,用一套CD226 McAb检测与截短突变体的免疫反应性,从而确定CD226 McAb识别CD226分子结构域的部位. 结果 PCR扩增出CD226分子相应目的片段序列,定向克隆入pcDNA3真核表达载体,DNA序列测定正确.转染COS7细胞后,流式细胞术检测CD226截短体分子有较高水平的表达.CD226 McAb Leo A1、New E1和FMU1～7均可识别CD226全长分子;Leo A1、New E1、FMU1、FMU2、FMU4和FMU5与截短突变体PTA1T1和PTA1T2均无反应性;FMU3可结合PTA1T1分子,不结合PTA1T2分子;FMU6和FMU7均可结合PTA1T1及PTA1T2分子. 结论 CD226 McAb Leo A1、New E1、FMU1、FMU2、FMU3、FMU4和FMU5识别CD226分子胞膜外区D1结构域,其中FMU3识别的位点位于V1和V2环之间;FMU6和FMU7识别D2结构域.
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