大肠杆菌中表达CrylC基因及其重组表达产物的纯化及复性

来源 :食品科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：YFY2006

【摘要】

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通过PCR方法将苏云金芽孢杆菌CrylC基因从原始质粒中克隆出来.由于CrylC基因携带了大量大肠杆菌稀有密码子,因此用PCR方法对其前86个密码子进行修改,以提高其在大肠杆菌BL21(

【作者】

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曹思硕许文涛冉文君梁立兴贺晓云罗云波元延芳黄昆

【机构】

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中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083;农业部转基因生物食用安全监督检验测试中心,北京,北京,100083;农业部转基因生物食用安

【出处】

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食品科学

【发表日期】

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2011年7期

【关键词】

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CrylC蛋白稀有密码子包涵体表达纯化复性折叠

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通过PCR方法将苏云金芽孢杆菌CrylC基因从原始质粒中克隆出来.由于CrylC基因携带了大量大肠杆菌稀有密码子,因此用PCR方法对其前86个密码子进行修改,以提高其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达量.CrylC蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式大量表达,将包涵体用8mol/L尿素溶解并用His Trap(TM)FF凝胶柱纯化.所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性折叠,最终得到可溶并有生物活性(由三化螟活性实验验证)的蛋白.CrylC蛋白纯度可达99.2%.

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